两种蛋白酶对于质谱法测定糖化血红蛋白结果的比较研究

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目的

探讨两种常用的蛋白水解酶(Glu-C和Lys-C)在质谱法测定糖化血红蛋白(HbA1C)中的差异性研究。

方法

病例对照研究。收集2012年2至4月北京朝阳医院门诊和住院患者剩余血液合计200 ml,患者来源中男90例,女70例,年龄20~60岁,平均年龄(44±16)岁。依据国际临床化学协会(IFCC)推荐的基于质谱法的HbA1C参考测量方法处理收集的血液样本(样本编号为:201201、201202、201203),分别应用两种常用的蛋白水解酶(Glu-C和Lys-C)酶解样本中的血红蛋白,使用固相萃取的方法进行质谱前处理,设定最适实验条件后,应用液相色谱串联质谱测定样本中HbA1C的含量。使用Sequest软件对制备的实验样本进行血红蛋白变异体的筛查,所有由液相色谱串联质谱获得的质谱结果都需使用Sequest软件针对人类国际蛋白指数(IPI)数据库搜索RAW文件,检索结果与血红蛋白变异体网站上公布的4种常见的血红蛋白变异体(HbS、HbC、HbD、HbE)进行比对。采用SPSS 13.0统计软件和Excel 2003对测量结果进行相关性分析,组间比较采用独立样本t检验。

结果

经液相色谱串联质谱检测结果可知,在检测HbA1C浓度时,分别用Glu-C和Lys-C酶解血液样本201201、201202、201203,其中经Lys-C酶解的样本HbA1C检测结果分别为(34.70±2.80)、(51.76±1.60)、(73.39±1.11)mmol/mol,经Glu-C酶解的样本糖化血红蛋白检测结果分别为(33.12±1.48)、(54.54±2.50)、(75.40±3.60)mmol/mol,组间比较差异无统计学意义,两种方法测定结果绘制相关曲线,R2均>0.995。经Sequest进行人类数据库检索,未筛查出4种常见的血红蛋白变异体的存在。

结论

在质谱法检测HbA1C时,应用上述两种常用的蛋白水解酶酶解血液样本时,可以得到较为一致的结果,两种方法检测结果相关性良好。(中华检验医学杂志,2013,36:733-737)

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