破碎法提取家蚕微孢子虫孢子核酸的PCR检测灵敏度试验

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蚕微粒子病检测技术是该病防治中的一项重要技术,本文在通过破碎法提高模板核酸获取量的基础上,对纯化家蚕微粒子虫孢子的PCR检测灵敏度进行了测试。提取核酸-模板稀释测试12对引物的灵敏度中有4对引物达到0.05粒(10^2粒/mL)、4对引物5粒(10^4粒/mL)、1对引物50粒(10^5粒/mL)、2对引物500粒(10^6粒/mL)和1对引物5000粒(10^7粒/mL)。两对灵敏度较高的引物(NbZS004F/NbZS004R和NbZS007F/NbZS007R)灵敏度临界值(0.05粒和0.005粒)的PCR重复检测率均为90%。纯化家蚕微粒子虫孢子稀释后提取核酸再进行PCR检测试验中,NbZS00aF/NbZS004R和NbZS007F/NbZS007R的灵敏度分别为:5粒(10^4粒/mL)和0.5粒(10^3粒/mL)。
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