建立大鼠血浆中耳聋左慈丸中成分毛蕊花糖苷、氧化芍药苷、松果菊苷、苯甲酰芍药苷的共检测LC-MS/MS定量方法,并运用此方法评价耳聋左慈丸在大鼠体内的药代动力学行为。采用甲醇作为蛋白沉淀剂,用蛋白沉淀法处理血浆样本,以甲醇为有机相,0.1%甲酸水溶液为水相,在负离子模式下对毛蕊花糖苷、氧化芍药苷、松果菊苷、苯甲酰芍药苷进行定量分析方法的建立,并且对所建方法进行方法学考证。选取健康SD大鼠,单次灌胃20 mL/kg（相当于原药10 g/kg剂量）的耳聋左慈丸提取液,运用建立的方法测定在给药后不同时间间隔的待测物质血浆浓度,并利用Phoenix WinNonlin8.3软件经非房室模型拟合计算药代动力学参数。方法学验证结果表明,毛蕊花糖苷（r=0.993 7）、氧化芍药苷（r=0.994 6）在0.5～50 ng/mL范围内线性良好,松果菊苷（r=0.993 6）、苯甲酰芍药苷（r=0.992 6）在1～100 ng/mL范围内线性良好,4种物质的批间及批内精密度的RSD均小于15%,批间及批内准确度均在85%～115%之间。提取回收率、基质效应和稳定性均满足相关要求。在大鼠单次灌胃耳聋左慈丸提取液后,4种待测物质都发生了较快的吸收和消除,氧化芍药苷、松果菊苷、苯甲酰芍药苷的血药浓度-时间曲线中都出现双峰现象;与其他3种物质相比,氧化芍药苷在大鼠血浆中浓度较高,cmax1为（24.40±4.78）ng/mL,cmax2为（22.50±2.70）ng/mL。结果表明,该方法的验证结果符合生物样本分析方法指导原则,可用于评价耳聋左慈丸提取液在大鼠体内的药代动力学行为。