【摘 要】
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目的 通过自然杀伤（NK）细胞体外培养和转录组学测序（RNA-seq）技术研究人NK细胞体外扩增情况及其功能活化的信号通路。方法 分离健康志愿者外周血单个核细胞（PBMC）,应用NK细胞培养法进行培养。采用流式细胞术、ELISA法和磁性细胞分选技术分析体外培养扩增不同阶段的NK细胞。获得纯化后的NK细胞进行RNA-seq检测，分析人NK细胞体外扩增情况及其功能活化的信号通路。结果 体外培养14 d
【基金项目】
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国家重点研发计划项目（2018YFA0900802）；
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目的 通过自然杀伤（NK）细胞体外培养和转录组学测序（RNA-seq）技术研究人NK细胞体外扩增情况及其功能活化的信号通路。方法 分离健康志愿者外周血单个核细胞（PBMC）,应用NK细胞培养法进行培养。采用流式细胞术、ELISA法和磁性细胞分选技术分析体外培养扩增不同阶段的NK细胞。获得纯化后的NK细胞进行RNA-seq检测，分析人NK细胞体外扩增情况及其功能活化的信号通路。结果 体外培养14 d后，NK细胞（CD3-CD56+）的比例达到90%以上。第10、14天NK细胞的杀伤活性均较第0天明显增强，且随着效靶比从5∶1、10∶1到20∶1,各组NK细胞对K562细胞的杀伤活性均逐步提高（F=124.40～5 512.00,P<0.05）。培养至第14天的NK细胞IFN-γ的分泌量显著高于第0、10天（q=67.17、7.75,P<0.05）。RNA-seq分析结果显示，第10、14天NK细胞与第0天NK细胞相比差异表达基因（DEGs）均较多，且第10天DEGs多于第14天。GO功能和KEGG通路富集分析显示这些DEGs主要与炎症反应、免疫反应、细胞分裂和增殖相关，而且显著富集在细胞周期、成骨细胞分化、造血细胞调控、NF-Kappa B等信号通路。结论 本研究发现CD16抗体联合5种细胞因子的培养方法可以有效诱导PBMC成为NK细胞，为NK细胞免疫治疗提供了理论基础和实验依据。
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