【摘 要】
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该文旨在构建过表达人GPR183的慢病毒载体,研究GPR183对急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphocytic leukemia, T-ALL)细胞Cutll1凋亡的影响。通过PCR法扩增人GPR183序列
【机 构】
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重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地;
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该文旨在构建过表达人GPR183的慢病毒载体,研究GPR183对急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphocytic leukemia, T-ALL)细胞Cutll1凋亡的影响。通过PCR法扩增人GPR183序列片段,并连接到慢病毒表达载体质粒p EZ-Lv201上,构建过表达GPR183慢病毒质粒,包装病毒,感染T-ALL Cutll1细胞, q-PCR及Western blot检测细胞GPR183表达水平;检测GPR183对Cutll1细胞生长、周期及凋亡影响。质粒PCR及测序结果显示,成功构建GPR183过表达慢病毒载体。感染Cutll1细胞后荧光显微镜下观察到绿色荧光,过表达组GPR183 mRNA及蛋白表达水平较对照组明显上升(P<0.01),成功构建过表达GPR183的Cutll1细胞株,过表达GPR183的Cutll1细胞生长明显受到抑制(P<0.001),凋亡水平较对照组显著升高(P<0.01),但不影响细胞周期。初步显示, GPR183能明显抑制T-ALL Cutll1细胞增长,促进细胞凋亡,为后续研究奠定基础。
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