【摘 要】
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目的探讨腺苷A3受体(A3AR)激活对体外肠上皮细胞屏障的作用及其潜在机制.方法使用A3AR激动剂2-Cl-IB-MECA处理TNF-α诱导的Caco-2细胞损伤模型.采用跨上皮细胞电阻值(TEER)法和细胞旁通透性测定法评估体外培养的上皮细胞屏障功能.采用免疫荧光法和蛋白质印迹法评估紧密连接蛋白ZO-1的分布和表达.采用蛋白质印迹法检测NF-κBp65、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)的表达水平.采用ELISA法检测细胞培养上清液中促炎细胞因子IL-1β、IL-8的表达水平
【机 构】
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518053 广东深圳,香港大学深圳医院消化内科;518053 广东深圳,香港大学深圳医院中心实验室
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目的探讨腺苷A3受体(A3AR)激活对体外肠上皮细胞屏障的作用及其潜在机制.方法使用A3AR激动剂2-Cl-IB-MECA处理TNF-α诱导的Caco-2细胞损伤模型.采用跨上皮细胞电阻值(TEER)法和细胞旁通透性测定法评估体外培养的上皮细胞屏障功能.采用免疫荧光法和蛋白质印迹法评估紧密连接蛋白ZO-1的分布和表达.采用蛋白质印迹法检测NF-κBp65、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)的表达水平.采用ELISA法检测细胞培养上清液中促炎细胞因子IL-1β、IL-8的表达水平.结果与对照组相比,TNF-α组TEER降低,细胞旁通透性增高,ZO-1表达水平降低,NF-κBp65、MLCK、p-MLC、IL-1β和IL-8的表达水平均升高,两组的差异均有统计学意义(P均<0.05).与TNF-α组相比,2-Cl-IB-MECA组TEER升高,细胞旁通透性降低,ZO-1表达水平升高,NF-κBp65、MLCK、p-MLC、IL-1β和IL-8的表达水平均降低,两组的差异均有统计学意义(P均<0.05).结论A3AR激活可减轻肠上皮细胞屏障损伤,该作用可能通过抑制NF-κB/MLCK/p-MLC信号通路实现.
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