【摘 要】
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目的 探讨胆管结扎诱导的大鼠肝纤维化模型的制备和改良的Friedman方法分离和培养肝星状细胞(HSC),以及HSC蛋白酶活化受体(PARs)的表达与HSC活化的关系.方法 采用结扎大鼠胆
【机 构】
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中国人民解放军第三军医大学西南医院消化病研究中心,重庆,400038中国人民解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所消化科,重庆,400038;
【基金项目】
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中国人民解放军第三军医大学校科研和教改项目;
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目的 探讨胆管结扎诱导的大鼠肝纤维化模型的制备和改良的Friedman方法分离和培养肝星状细胞(HSC),以及HSC蛋白酶活化受体(PARs)的表达与HSC活化的关系.方法 采用结扎大鼠胆管诱导肝纤维化动物模型,应用改良的Friedman方法和Nycodenz一步密度梯度离心法分离肝纤维化大鼠HSC.病理学检测大鼠肝纤维化分级,免疫组化检测Desmin、α-SMA和PARs在HSC的表达,实验同时设立阴性对照.结果 模型组大鼠肝纤维化病理学分级第1周为0,第2～3周多为1～2级,第4、5周为2～3级,第6周肝组织结构破坏,肝细胞变性坏死,炎性细胞浸润,病理学分级多为4级.改良的Friedman方法大鼠肝脏可获得5×106～1×107个细胞,存活率在96%以上,纯度平均为95%～96%.免疫组化检测α-SMA和PARs在培养的HSC于7、14天其表达逐渐增多,二者表达呈一致关系.结论 结扎大鼠胆管建立的肝纤维化模型形成时间较短,实验中无有毒物质接触,是肝纤维化的理想模型;改良的Friedman方法分离和培养HSC,在保证HSC纯度的同时,提高了产量和活率,是研究HSC的有效方法;PARs的表达与HSC活化相关.
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