【摘 要】
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目的探讨HIV派生的MicroRNA99(miRNA99)对巨噬细胞焦亡的影响及机制。方法用佛波酯(PMA)刺激人单核白血病细胞(THP-1)分化成贴壁的巨噬细胞，流式细胞术测定细胞表面CD11b；将鉴定好的细胞分组，分为PBS组(空白对照)、LPS＋ATP组(阳性对照)、miRNA99组(实验组)；将miRNA99 mimics转染至细胞，采用Western blot(WB)方法测定活化casp
【机 构】
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山西医科大学附属第二医院，太原 030000,山西医科大学附属第二医院，太原 030000,山西医科大学附属第二医院，太原 030000,山西医科大学附属第二医院，太原 030000,山西医科大学附属
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目的探讨HIV派生的MicroRNA99(miRNA99)对巨噬细胞焦亡的影响及机制。
方法用佛波酯(PMA)刺激人单核白血病细胞(THP-1)分化成贴壁的巨噬细胞，流式细胞术测定细胞表面CD11b；将鉴定好的细胞分组，分为PBS组(空白对照)、LPS＋ATP组(阳性对照)、miRNA99组(实验组)；将miRNA99 mimics转染至细胞，采用Western blot(WB)方法测定活化caspase-1蛋白水平；采用ELISA法测定细胞上清液IL-18、IL-1β的水平；将巨噬细胞细胞又分为2组，miRNA99＋TLR8 RNAi质粒组实验组、miRNA99＋空质粒组，转染细胞，在共聚焦下观察细胞内荧光；采用WB方法检测TLR8蛋白及活化caspase-1蛋白水平；用ELISA法测定TLR8沉默后细胞培养上清液中IL-18、IL-1β的水平。
结果经PMA刺激24 h后细胞贴壁生长，伸出伪足，表面CD11b阳性率在99%以上。LPS＋ATP组与miRNA99组活化caspase-1蛋白水平、上清液中IL-18、IL-1β的含量明显高于对照组(P<0.05)，差异有统计学意义。转染TLR8 RNAi质粒后巨噬细胞内呈现绿色荧光，WB显示实验组TLR8蛋白表达明显减少。在TLR8质粒＋miRNA99组，活化caspase-1蛋白水平及上清液中IL-18、IL-1β的含量明显低于空质粒＋miRNA99组(P<0.05)，差异有统计学意义。
结论HIV派生的miRNA99能诱导巨噬细胞发生焦亡，miRNA99诱导焦亡的机制有TLR8途径的参与。
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