紫草素对人牙周膜干细胞增殖和分化的影响

来源 :山西医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Bo_Gao
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目的 探索紫草素对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖和成骨分化的影响。方法 从健康人牙周膜组织中分离培养hPDLSCs,通过流式细胞仪检测hPDLSCs表面抗原(STRO-1和CD-146)和造血干细胞表面抗原(CD34和CD45)的表达。将hPDLSCs按照不同浓度紫草素(0,0.1,1,10,100μmol/L)处理,通过MTT法检测紫草素培养24 h后hPDLSCs活性。将hPDLSCs用成骨分化诱导培养基和不同浓度的紫草素(0,0.1,1,10,100μmol/L)联合培养21 d,然后检测各组hPDLSCs的碱性磷酸酶(ALP)活性,通过茜素红染色观察钙化结节,通过qRT-PCR和Western blot检测Runt相关转录因子2 (RUNX2)、骨钙素(OCN)和Smad4的mRNA和蛋白表达。结果 分离培养的hPDLSCs主要呈束状长梭形。hPDLSCs中STRO-1 (99.64%)和CD146(99.83%)主要为阳性,CD34(0.11%)和CD45(1.04%)主要为阴性。单独使用紫草素培养后,与0μmol/L组相比,1μmol/L组和10μmol/L组hPDLSCs的相对细胞活力升高(P<0.05)。使用成骨分化诱导培养基和紫草素联合培养后,与0μmol/L组相比,1μmol/L组和10μmol/L组hPDLSCs中相对ALP活性升高(P <0.05),hPDLSCs的钙化结节形成量(OD590nm)升高(P<0.05)。然而,与0μmol/L组比较,0.1μmol/L组和100μmol/L组hPDLSCs的相对细胞活力、相对ALP活性和钙化结节形成量差异无统计学意义(P>0.05)。与0μmol/L组相比,1μmol/L组和10μmol/L组hPDLSCs中RUNX2、OCN和Smad4的mRNA和蛋白水平均显著升高(P<0.05),100μmol/L组Smad4 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05),然而,0.1μmol/L组和100μmol/L组hPDLSCs中RUNX2和OCN mRNA和蛋白水平与0μmol/L组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 适当浓度的紫草素可促进hPDLSCs的增殖和成骨分化。
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