HPLC法测定人凝血酶原复合物中氨基酸含量

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目的:建立用高效液相色谱法测定人凝血酶原复合物中氨基酸含量。方法:采用6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(AQC)为衍生剂,与氨基酸柱前衍生后,用Agilent 1200高效液相色谱仪,AccQ.Tag C18柱(waters 150 mm×3.9 mm,4μm),以水Eluent(醋酸盐-磷酸盐缓冲液)稀释液和乙腈进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,柱温37℃,进样量10μL。结果:各氨基酸在32 min内测定完毕,回收率为99.3%~100.6%。RSD均小于1.5%。结论:本法分离度好,快速、简便,可作为产品的质量控制方法。 Objective: To establish a HPLC method for the determination of amino acids in human prothrombin complex. Methods: Amino acids were derivatized with 6-aminoquinoline-N-hydroxysuccinimidylcarbamate (AQC) as a derivatizing agent. After derivatization with the amino acids, the Agilent 1200 high performance liquid chromatography and AccQ.Tag C18 column 150 mm × 3.9 mm, 4 μm) with a gradient of Eluent (acetate-phosphate buffer) and acetonitrile. The detection wavelength was 248 nm and the column temperature was 37 ° C. The injection volume was 10 μL. Results: The determination of each amino acid in 32 min was completed, the recovery was 99.3% ~ 100.6%. RSD less than 1.5%. Conclusion: The separation of this method is good, fast and simple, and can be used as the quality control method of the product.
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