【摘 要】
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建立胎牛子宫类器官及内膜上皮细胞分离培养方法,为研究病毒、细菌、营养元素以及毒物等与子宫相互作用机理提供研究平台和模型.试验采用4～6月龄胎牛子宫为研究对象,对子宫组织进行类器官培养,比较不同胎龄胎牛子宫类器官培养成功率,然后从类器官出芽组织分离获得原代子宫内膜上皮细胞,并与组织块分离法培养的细胞形态学、纯化培养、生长速度等方面进行比较,采用免疫细胞化学法对获得的子宫内膜上皮细胞进行角蛋白表达的鉴定.结果 表明用子宫内膜组织进行类器官培养,4月龄胎牛子宫类器官的出芽率显著高于5、6月龄(P＜0.05).通
【机 构】
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河南农业大学动物医学院,河南郑州450046
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建立胎牛子宫类器官及内膜上皮细胞分离培养方法,为研究病毒、细菌、营养元素以及毒物等与子宫相互作用机理提供研究平台和模型.试验采用4～6月龄胎牛子宫为研究对象,对子宫组织进行类器官培养,比较不同胎龄胎牛子宫类器官培养成功率,然后从类器官出芽组织分离获得原代子宫内膜上皮细胞,并与组织块分离法培养的细胞形态学、纯化培养、生长速度等方面进行比较,采用免疫细胞化学法对获得的子宫内膜上皮细胞进行角蛋白表达的鉴定.结果 表明用子宫内膜组织进行类器官培养,4月龄胎牛子宫类器官的出芽率显著高于5、6月龄(P＜0.05).通过类器官出芽进行原代子宫内膜上皮细胞的培养,相较于传统的组织块分离法,更易获得子宫内膜上皮细胞,且获得的细胞形态良好,纯度在95％以上,能够稳定传至8代.研究表明,低月龄的胎牛子宫组织块更易于获得类器官;通过类器官出芽组织获得子宫内膜上皮细胞是一种较为简便、高效的方法,且形态均一、活性好,传代时间更长.
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为研究佛耳草总黄酮的提取工艺,以浸膏收率和总黄酮的含量为指标,采用正交试验法,考察乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数4个因素对提取效果的影响.结果:建立了佛耳草药材及其提取物中总黄酮的紫外-可见分光光度法,优化佛耳草最佳提取工艺为采用20倍量60％的乙醇提取2次,每次2h.试验表明,本研究建立的分析方法精密度、准确度较高,重现性较好.优化的提取工艺经济、方便、可行.
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