【摘 要】
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目的 引入内部核糖体进入位点(IRES),构建HSV1-tk与hIL-1Ra双基因共表达AAV重组载体并检测其在滑膜细胞中的表达.方法 PCR扩增HSV1-tk、IRES及hIL-1Ra基因片段,分别与pMD18-T
【机 构】
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山东大学附属省立医院,关节外科,济南,250021;山东大学附属省立医院,科研中心,济南,250021
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目的 引入内部核糖体进入位点(IRES),构建HSV1-tk与hIL-1Ra双基因共表达AAV重组载体并检测其在滑膜细胞中的表达.方法 PCR扩增HSV1-tk、IRES及hIL-1Ra基因片段,分别与pMD18-T simple载体连接,测序后,hIL-1Ra与HSV1-tk先后插入pMD-IRES,构建重组质粒pMD-HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra,酶切出HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra片段,克隆至AAV-栽体质粒pSNAV2.0上,构建成重组共表达质粒pSNAV2.0-HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra,酶切鉴定后,用脂质体转染上述质粒至原代骨关节炎(OA)滑膜细胞,RT-PCR法鉴定共表达质粒在滑膜细胞中的表达.结果 酶切鉴定证实重组共表达质粒构建正确;RT-PCR检测到转染后的OA滑膜细胞中表达HSV1-tk与ML-1Ra.结论 成功构建了重组共表达质粒pSNAV2.0-HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra;重组质粒转染OA滑膜细胞后,能表达HSV1-tk与hIL-1Ra.这为OA的基因治疗研究提供了理论依据.
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