大鼠心肌干细胞的体外分离培养

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目的自大鼠心脏中分离得到心肌干细胞,体外培养并观察其向心肌细胞的分化能力。方法无菌操作取下新生鼠心脏,经反复消化后,弃去消化液,将所得残余组织块进行培养,视生长情况进行传代(一般1周左右)。传代细胞采用不同培养液进行培养,约2周后,镜下可见搏动细胞时,分别对原代细胞和传代细胞进行流式细胞鉴定及免疫组化染色。结果从消化后残留心肌组织块中成功培养出原代细胞,经流式细胞仪鉴定其表型为c-kit,CD 31阳性,CD 34,CD 45、心肌钙蛋白T(Cardiac Troponin T,CTnT)阴性。细胞经传代培养2周后,单个细胞开始出现搏动,亦可见成团细胞的同步收缩。再次流式鉴定的结果,表型有所改变,主要是CD 31转阴性,CTnT阳性,而c-kit、CD 34、CD 45无明显变化。免疫组化证实,原代细胞并不表达心肌细胞结构蛋白CTnT,而在部分传代细胞内可见CTnT表达。结论成功自心脏中分离得到一类表型为c-kit~+、CD 31~+、CD 34~-、CD 45~-、CTnT~-的细胞,经使用不同成份培养液传代培养,可分化可搏动的心肌细胞,并表达心肌结构蛋白。
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