【摘 要】
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用家蚕核型多角体病毒的全基因组DNA与Ac-BacmidDNA共转染家蚕BmN细胞,构建转座一穿梭载体Bm-Bacmid.另一供体质粒以转座方式将乙肝病毒e抗原基因HBeAg整合到Bm-Bacmid的attT
【机 构】
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南京军区军事医学研究所分子生物学实验室,南京,210002武汉大学病毒研究所,武汉,430073;
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用家蚕核型多角体病毒的全基因组DNA与Ac-BacmidDNA共转染家蚕BmN细胞,构建转座一穿梭载体Bm-Bacmid.另一供体质粒以转座方式将乙肝病毒e抗原基因HBeAg整合到Bm-Bacmid的attTn7位点上成为重组rBmHBe.结果表明Bm-Bacmid既能在大肠杆菌中以质粒的形式复制,又能在家蚕BmN细胞和草地夜蛾Sf9细胞中复制,形成感染性病毒粒子.Southernblotting证实重组病毒的构建是正确的.BmN细胞能正确识别与切割HBeAg信号肽序列,SDS-PAGE表明HBeAg基因在家蚕细胞中高效表达,ELISA测定培养上清中HBeAg效价达1:32000,细胞内HBeAg效价为1:2000,培养液及细胞内的HBcAg含量极低(<1:160).
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