【摘 要】
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目的:通过对重叠延伸PCR技术的改进,建立一种更有效的构建融合基因的方法。方法:优化SOE-PCR体系的模板浓度、中间引物互补长度、起始模板的纯度及循环数等条件。结果:中间引
【机 构】
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河南科技大学医学技术与工程学院; 河南科技大学第一附属医院; 河南科技大学药理学与医学分子生物学重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(“T-2毒素对小鼠睾丸间质细胞的毒性分子机制”,No.31201119)资助
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目的:通过对重叠延伸PCR技术的改进,建立一种更有效的构建融合基因的方法。方法:优化SOE-PCR体系的模板浓度、中间引物互补长度、起始模板的纯度及循环数等条件。结果:中间引物的互补序列长度一般应在大约25bp时扩增效果最好;降低第一轮PCR循环数至5个后作为模板进行SOE-PCR。成功构建了BTRCP-CypA融合基因,获得了特异性强和保真度高的连接产物。结论:改进后的SOE-PCR提高了特异性,为广泛进行基因特别是高GC含量或复杂模板基因片段的连接操作奠定了基础。
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