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摘要 采用高效液相色谱法，以甲醇 乙腈 水（用磷酸调pH=3.0）溶液为流动相，使用ZORBAX SB-C18 5 μm为填料的不锈钢柱，检测波长为220 nm，对丁虫腈乳油进行定量分析。结果表明，该方法的标准偏差为0.14，相对标准偏差为0.91%，平均回收率为99.17%，丁虫腈的检测浓度在0.01～0.50 mg/mL范围内的线性相关系数为0.999 7。
关键词 高效液相色谱；丁虫腈乳油；分析方法
中图分类号 S657.7 2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）12-0118-02
Abstract To establish a HPLC method for determination of flufiprole EC，methanol，acetonitrile and water（pH was adjusted to 3.0 with phosphoric acid）were used as mobile phase，with a ZORBAX SB-C18 5 μm as chromatographic column，and UV detection wavelength was set at 220 nm. The standard deviation of this method was 0.14， the variation coefficient was 0.91%，and the average recovery rate was 99.17%.The standard curve was linear over the range of 0.01-0.50 mg/mL with linear correlation coefficient as 0.999 7.
Key words HPLC；flufiprole EC；analysis method
丁虫腈（flufiprole，CAS号：704886-18-0）是一种新型苯基吡唑类广谱杀虫剂，对半翅目、鳞翅目、缨翅目害虫具有优异防效。其杀虫机理新颖独特、活性高，具有胃毒、触杀及一定的内吸作用，与菊酯类、有机磷类和氨基甲酸酯类等农药无交互抗性，可用于防治水田稻飞虱、二化螟、稻纵卷叶螟以及蔬菜田中的小菜蛾[1-2]。目前，关于丁虫腈乳油的分析方法未见公开报道。本文采用高效液相色谱法测定乳油制剂中的丁虫腈含量，该方法操作简单、快速、准确，可用于产品生产过程质量控制。
1 材料与方法
1.1 仪器及试剂
1.1.1 仪器设备。Agilent 1260高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），具有可变波长紫外检测器和自动进样器；Agilent色谱工作站；色谱柱：150.0 mm×4.6 mm（i.d.）不锈钢柱，内装ZORBAX SB-C18 5 μm填充物；Milli-Q超纯水仪。
1.1.2 试剂。甲醇、乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯；丁虫腈标样（购于德国Dr Ehrenstorser GmbH，纯度99.0%）；丁虫腈乳油（企业提供）。
1.2 色谱条件
流动相为甲醇∶乙腈∶水=40∶30∶30（v/v/v，用磷酸调pH=3.0），检测波长220 nm，流速1.0 mL/min，进样体积20 μL，柱温30 ℃。
1.3 试验方法
1.3.1 标样溶液的配制。准确称取丁虫腈标准品50 mg（精确至0.000 2 g）于50 mL容量瓶中，用乙腈定容摇匀。
1.3.2 供试品溶液的配制。准确称取0.07 g（精确至0.000 2 g）丁虫腈乳油试样，置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解定容摇匀后待测。
1.3.3 测定。在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液峰面积相对变化<1.5%后按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液顺序进行分析。
通过比较标样和样品的保留时间进行定性分析，将测得的2针试样溶液及试样前后2针标样溶液中丁虫腈的峰面积分别进行平均，试样中丁虫腈的质量分数（X）按下式计算：
式中，m1为试样的质量（g）；m2为标样的质量（g）；A1为2针试样溶液中丁虫腈峰面积的平均值；A2为2针标样溶液中丁虫腈峰面积的平均值；P为标样中丁虫腈的质量分数（%）。
1.4 方法学验证
1.4.1 检出限及定量限。按照1.3.1所述，逐级稀释丁虫腈标样溶液进行测定，按3倍信噪比和10倍信噪比分别计算检出限和定量限[3]。
1.4.2 线性关系。将1.3.1 所述配制的标样溶液，用乙腈稀释成分别含0.01、0.05、0.10、0.20、0.50 mg/mL丁虫腈的标准系列溶液，按上述的色谱条件分别进样测定峰面积。以标准品峰面积为纵坐标（Y），以5个不同浓度点的供试液的浓度（mg/L）为横坐标（X），拟合回归线性方程[3]。
1.4.3 精密度。从同一批丁虫腈乳油样品中准确称取5个试样，按1.3.2配制试样溶液，按上述色谱条件注入高效液相色谱仪，计算平均峰面积及相对标准偏差（RSD）[3]。
1.4.4 回收率。准确称取5份已知含量的样品，分别加入不同量丁虫腈标准品，在上述操作条件下测定加标回收率[3]。
2 结果与分析
2.1 色谱条件的选择
用紫外检测器对相同条件下分离后的丁虫腈及其杂质在190～370 nm波长范围内进行扫描，发现丁虫腈的最大吸收波长在220 nm，此时杂质响应也较灵敏，故选择220 nm作为检测波长[4]。
根据丁虫腈的理化性质，选择ZORBAX SB-C18为分析柱。先后考察了以甲醇-水、甲醇-磷酸溶液、乙腈-水、乙腈-磷酸溶液、甲醇-乙腈-水为流动相。当以甲醇-乙腈-水为流动相时，在保证较好分离的同时获得了较好的峰型。经优化，当甲醇∶乙腈∶水=40∶30∶30（v/v/v）时，并用磷酸优化流动相溶液pH=3.0，流速为1.0 mL/min时，试样溶液中丁虫腈和杂质分离度和峰型较好，丁虫腈的保留时间为8.099 min。丁虫腈标样和乳油样品的高效液相色谱图如图1、2所示。
2.2 检出限及定量限
将标样溶液经过逐级稀释后进样分析，最终得出丁虫腈的检出限为 2.19 μg/mL，定量限为 6.98 μg/mL。
2.3 线性关系
由图3可知，经回归分析得到丁虫腈的线性方程为Y=85 255X 1 714，线性相关系数为0.999 7，表明丁虫腈在0.01～0.50 mg/mL内线性关系良好。
2.4 精密度
精密度试验标准偏差为0.14，RSD为0.91%，表明该方法精密度良好，满足检测要求。
2.5 加标回收率
该检测方法加标回收率试验结果如表1所示，可以看出，测得方法的平均回收率为99.17%，表明在添加不同浓度标准溶液后回收率及相对标准偏差符合检测要求。
3 结论
本试验建立了高效液相色谱法测定丁虫腈乳油含量的分析方法，结果表明，本方法准确可靠，专属性强，精密度较高，线性关系和回收率良好，可用于丁虫腈乳油产品的质量控制。
4 参考文献
[1] 李彦龙.创制杀虫剂丁虫腈[J].农药，2014，53（2）：126-128.
[2] 何健，由宗政，廖云燕，等.丁虫腈在土壤中的吸附及移动特性[J].农药，2012，51（10）：720-723.
[3] 国家药典委员会.《中华人民共和国药典》2015版二部附錄[M].北京：中国医药科技出版社，2016.
[4] 曹磊，顾爱国，王莉.高效液相色谱法测定0.06%甾烯醇微乳剂中有效成分含量方法研究[J].现代农业科技，2018（2）：125-126.
关键词 高效液相色谱；丁虫腈乳油；分析方法
中图分类号 S657.7 2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）12-0118-02
Abstract To establish a HPLC method for determination of flufiprole EC，methanol，acetonitrile and water（pH was adjusted to 3.0 with phosphoric acid）were used as mobile phase，with a ZORBAX SB-C18 5 μm as chromatographic column，and UV detection wavelength was set at 220 nm. The standard deviation of this method was 0.14， the variation coefficient was 0.91%，and the average recovery rate was 99.17%.The standard curve was linear over the range of 0.01-0.50 mg/mL with linear correlation coefficient as 0.999 7.
Key words HPLC；flufiprole EC；analysis method
丁虫腈（flufiprole，CAS号：704886-18-0）是一种新型苯基吡唑类广谱杀虫剂，对半翅目、鳞翅目、缨翅目害虫具有优异防效。其杀虫机理新颖独特、活性高，具有胃毒、触杀及一定的内吸作用，与菊酯类、有机磷类和氨基甲酸酯类等农药无交互抗性，可用于防治水田稻飞虱、二化螟、稻纵卷叶螟以及蔬菜田中的小菜蛾[1-2]。目前，关于丁虫腈乳油的分析方法未见公开报道。本文采用高效液相色谱法测定乳油制剂中的丁虫腈含量，该方法操作简单、快速、准确，可用于产品生产过程质量控制。
1 材料与方法
1.1 仪器及试剂
1.1.1 仪器设备。Agilent 1260高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），具有可变波长紫外检测器和自动进样器；Agilent色谱工作站；色谱柱：150.0 mm×4.6 mm（i.d.）不锈钢柱，内装ZORBAX SB-C18 5 μm填充物；Milli-Q超纯水仪。
1.1.2 试剂。甲醇、乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯；丁虫腈标样（购于德国Dr Ehrenstorser GmbH，纯度99.0%）；丁虫腈乳油（企业提供）。
1.2 色谱条件
流动相为甲醇∶乙腈∶水=40∶30∶30（v/v/v，用磷酸调pH=3.0），检测波长220 nm，流速1.0 mL/min，进样体积20 μL，柱温30 ℃。
1.3 试验方法
1.3.1 标样溶液的配制。准确称取丁虫腈标准品50 mg（精确至0.000 2 g）于50 mL容量瓶中，用乙腈定容摇匀。
1.3.2 供试品溶液的配制。准确称取0.07 g（精确至0.000 2 g）丁虫腈乳油试样，置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解定容摇匀后待测。
1.3.3 测定。在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液峰面积相对变化<1.5%后按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液顺序进行分析。
通过比较标样和样品的保留时间进行定性分析，将测得的2针试样溶液及试样前后2针标样溶液中丁虫腈的峰面积分别进行平均，试样中丁虫腈的质量分数（X）按下式计算：
式中，m1为试样的质量（g）；m2为标样的质量（g）；A1为2针试样溶液中丁虫腈峰面积的平均值；A2为2针标样溶液中丁虫腈峰面积的平均值；P为标样中丁虫腈的质量分数（%）。
1.4 方法学验证
1.4.1 检出限及定量限。按照1.3.1所述，逐级稀释丁虫腈标样溶液进行测定，按3倍信噪比和10倍信噪比分别计算检出限和定量限[3]。
1.4.2 线性关系。将1.3.1 所述配制的标样溶液，用乙腈稀释成分别含0.01、0.05、0.10、0.20、0.50 mg/mL丁虫腈的标准系列溶液，按上述的色谱条件分别进样测定峰面积。以标准品峰面积为纵坐标（Y），以5个不同浓度点的供试液的浓度（mg/L）为横坐标（X），拟合回归线性方程[3]。
1.4.3 精密度。从同一批丁虫腈乳油样品中准确称取5个试样，按1.3.2配制试样溶液，按上述色谱条件注入高效液相色谱仪，计算平均峰面积及相对标准偏差（RSD）[3]。
1.4.4 回收率。准确称取5份已知含量的样品，分别加入不同量丁虫腈标准品，在上述操作条件下测定加标回收率[3]。
2 结果与分析
2.1 色谱条件的选择
用紫外检测器对相同条件下分离后的丁虫腈及其杂质在190～370 nm波长范围内进行扫描，发现丁虫腈的最大吸收波长在220 nm，此时杂质响应也较灵敏，故选择220 nm作为检测波长[4]。
根据丁虫腈的理化性质，选择ZORBAX SB-C18为分析柱。先后考察了以甲醇-水、甲醇-磷酸溶液、乙腈-水、乙腈-磷酸溶液、甲醇-乙腈-水为流动相。当以甲醇-乙腈-水为流动相时，在保证较好分离的同时获得了较好的峰型。经优化，当甲醇∶乙腈∶水=40∶30∶30（v/v/v）时，并用磷酸优化流动相溶液pH=3.0，流速为1.0 mL/min时，试样溶液中丁虫腈和杂质分离度和峰型较好，丁虫腈的保留时间为8.099 min。丁虫腈标样和乳油样品的高效液相色谱图如图1、2所示。
2.2 检出限及定量限
将标样溶液经过逐级稀释后进样分析，最终得出丁虫腈的检出限为 2.19 μg/mL，定量限为 6.98 μg/mL。
2.3 线性关系
由图3可知，经回归分析得到丁虫腈的线性方程为Y=85 255X 1 714，线性相关系数为0.999 7，表明丁虫腈在0.01～0.50 mg/mL内线性关系良好。
2.4 精密度
精密度试验标准偏差为0.14，RSD为0.91%，表明该方法精密度良好，满足检测要求。
2.5 加标回收率
该检测方法加标回收率试验结果如表1所示，可以看出，测得方法的平均回收率为99.17%，表明在添加不同浓度标准溶液后回收率及相对标准偏差符合检测要求。
3 结论
本试验建立了高效液相色谱法测定丁虫腈乳油含量的分析方法，结果表明，本方法准确可靠，专属性强，精密度较高，线性关系和回收率良好，可用于丁虫腈乳油产品的质量控制。
4 参考文献
[1] 李彦龙.创制杀虫剂丁虫腈[J].农药，2014，53（2）：126-128.
[2] 何健，由宗政，廖云燕，等.丁虫腈在土壤中的吸附及移动特性[J].农药，2012，51（10）：720-723.
[3] 国家药典委员会.《中华人民共和国药典》2015版二部附錄[M].北京：中国医药科技出版社，2016.
[4] 曹磊，顾爱国，王莉.高效液相色谱法测定0.06%甾烯醇微乳剂中有效成分含量方法研究[J].现代农业科技，2018（2）：125-126.