【摘 要】
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目的 探索在低糖缺氧的大鼠H9C2心肌细胞中,长链非编码RNA(lncRNA)NR_027324和miR-103-3p的表达变化,以及lncRNA NR_027324对miR-103-3p的靶向调节关系.方法 利用逆转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定在低糖缺氧H9C2细胞中lncRNA NR_027324和miR-103-3p的表达变化.采用生物信息学的方法,预测H9C2细胞中NR_027324序列上的miR-103-3p结合位点.将NR_027324的3\'UTR及点突变序列插入荧光素酶报
【机 构】
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辽宁省人民医院(中国医科大学人民医院)心内科,沈阳 110067;辽宁省肿瘤医院(中国医科大学肿瘤医院)消化泌尿 骨软放疗科,沈阳 110042;中国医科大学附属盛京医院心内科,沈阳 110020
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目的 探索在低糖缺氧的大鼠H9C2心肌细胞中,长链非编码RNA(lncRNA)NR_027324和miR-103-3p的表达变化,以及lncRNA NR_027324对miR-103-3p的靶向调节关系.方法 利用逆转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定在低糖缺氧H9C2细胞中lncRNA NR_027324和miR-103-3p的表达变化.采用生物信息学的方法,预测H9C2细胞中NR_027324序列上的miR-103-3p结合位点.将NR_027324的3\'UTR及点突变序列插入荧光素酶报告载体中,并分别与miR-103-3p类似物(miR-103-3p-mimic)或miR-103-3p类似物阴性对照(mimic-NC),共转染293T细胞.48 h后,通过双荧光素酶检测试剂盒,检测荧光素酶的活性,确定NR_027324与miR-103-3p的靶向关系.通过进一步质粒转染过表达和RNA干扰技术,分别上调和下调H9C2细胞中NR_027324的表达,验证miR-103-3p表达变化.结果 低糖缺氧H9C2细胞中,NR_027324表达量明显上调,miR-103-3p表达量下降,ATG5表达量上调.293T细胞中双荧光素酶报告系统结果提示,pmirGLO-NR_027324wt 3\'UTR质粒能够与miR-103-3p结合,并抑制双荧光素酶活性,结合位点定点突变后,pmirGLO-NR_027324mut 3\'UTR质粒不能与miR-103-3p结合,不能影响双荧光素酶活性的变化.通过质粒转染过表达和RNA干扰技术分别上调和下调H9C2细胞中NR_027324的表达,发现miR-103-3p的表达趋势与之相反,而ATG5表达变化趋势与NR_027324趋向一致.结论 低糖缺氧大鼠H9C2细胞中,NR_027324表达量明显上调,miR-103-3p表达量明显下调,miR-103-3p是NR_027324的靶基因.
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