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【摘要】目的：建立脑脉醒神胶囊中三七皂苷R1含量测定的方法，为其制定质量标准提供依据。方法：采用C18色谱柱；流动相：乙腈-水梯度洗脱；流速：10mL/min；柱温：25℃；检测波长：203nm。结果：三七皂苷R1进样量在005～03μg之间与峰面积呈良好的线性关系，r=09993，平均回收率9930%，RSD为074%（n=6）。结论：本方法简便、准确、可靠，可用于脑脉醒神胶囊制剂的质量控制。
【关键词】脑脉醒神胶囊；三七皂苷R1；HPLC；含量测定
【中图分类号】R9141【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）21-0004-03
Determination of Notoginsenoside R1 in Naomai Xingshen Capsules by HPLC
ZHANG YuZENG Congyan*HU YuliangZHUO BinCHEN Jiancong
Affiliated Zhongshan Hospital of Guangzhou University of TCM，Zhongshan 528401 ，China
Abstract：Objective To establish a method for the determination of Notoginsenoside R1 in Naomai Xingshen Capsule and control its quanlity. Methods Separation and determination of allantoin were accessed by using an C18 column and a mobile phase of acetonitrile- water gradient elution.The flow rate was 10mL/min，temperature at 25℃ and detection wavelength at 203nm. Results The linear range was 005～03μg，r=09993，marked recovety rate was 9930%，and RSD=074%（n=6）.Conclusion The method in this paper could provide an evidence for quality control of Naomai Xingshen Capsule.
Keywords：Naomai Xingshen Capsule；Notoginsenoside R1；HPLC；Content Determination
脑脉醒神胶囊系由三七、枳实、大黄、栀子、黄芩、桃仁、丹参等十七味中药经提取加工制成的胶囊剂，具有活血化瘀、化痰开窍、通腑泻热、开窍醒脑的功效，临床用于脑外伤、中风之神昏、头晕头痛、大便秘结等。其中三七为方中主药，而三七皂苷R1又是三七中的主要活性成分之一。现代药理研究表明，三七皂苷R1能改善微循环并适度延长凝血时间，[1]是三七活血化瘀的有效成分，这与脑脉醒神胶囊活血化瘀功效一致，提示三七皂苷R1为该制剂中主要活性成分。为了更好地控制产品质量，保证临床用药安全有效，研究建立了高效液相色谱法（HPLC）测定该制剂中三七皂苷R1含量的方法现报道如下。
1仪器与材料
11仪器Agilent1260高效液相色谱仪；色谱柱：Venusil XBP C18（L）柱（250mm×46mm，5μm，Agela Technologies）。
[JP2]12材料三七皂苷R1对照品（批号：110745-200617，中国食品药品检定研究院）；脑脉醒神胶囊（批号：20140313、20150302、20160130）。乙腈为色谱纯（批号：AC-12960217，瑞典OCEANPAK公司）；甲醇为分析纯（批号：1506031，西陇化工股份有限公司）。[JP]
2方法与结果
21色谱条件以十八烷基硅烷键全硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A ，水为流动相 B，按表1的规定进行梯度洗脱；流速为10mL/min；柱温为25℃；检测波长为 203nm；进样10μL。理论板数按三七皂苷R1峰算应不低于3000。
22对照品溶液制备精密称取三七皂苷R1对照品适量，加甲醇溶解，制成每lmL含50μg的溶液，作为对照品溶液。
23供试品溶液制备取本品10粒，内容物研细，精密称取约1g，置于塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
24阴性干扰试验取缺三七阴性样品，按照“23”项下供试品溶液制备方法制备缺三七阴性样品溶液，再按“21”项下色谱条件分析，结果在与对照品保留时间相同的位置上无峰出现，表明脑脉醒神胶囊中其他成分对三七皂苷Rl的测定无干扰。见图1。
25线性范围考察精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5、6μL，进样，按“21”项下色谱条件进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，三七皂苷R1对照品进样量为横坐标。绘制标准曲线，得回归方程为Y=47218X+11542，r=09993。结果表明三七皂苷R1进样量在005～03μg之间呈良好的线性关系。
26精密度试验取同一对照品溶液按“21”项下色谱条件重复进样测定6次，三七皂苷R1峰面积的RSD为140%，结果表明精密度良好。
27重复性试验取同一批样品（批号：20160130）6份，分别按“23”项下的方法制备供试品溶液，各进样20μL，按“21”项下色谱条件进行测定，结果三七皂苷R1峰面积的RSD为120%，表明方法重现性良好。 28稳定性试验取样品（批号：20160130）适量，按“23”项下的方法制成供试品溶液，放置0、1、2、4、8、24h，分别进样20μL，按“21”项下色谱条件进行测定，结果三七皂苷R1峰面积的RSD为111%，表明样品溶液室温放置24h稳定。
29回收率试验精密称取已知含量的样品（批号：20140313）6份，分别添加三七皂苷R1对照品适量，按“23”项下的方法制成供试品溶液，各进样10μL，按“21”项下色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表2。
210样品含量测定取3个批号的样品，按 “23”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取20μL进样，测定三七皂苷R1峰面积，根据峰面积用标准曲线法计算样品含量。结果见表3。
3讨论
三七具有散瘀止血，消肿定痛的作用[2]，现代药理实验研究表明其在抗凝血、抗冠心病、扩张血管及保护脑损伤等方面作用明显[3]，是脑脉醒神胶囊处方中具有活血化瘀作用的主要药物，故建立其有效成分含量测定方法，可进一步加强对脑脉醒神胶囊的整体质量控制。实验中供试品溶液的制备方法及色谱条件均参照2015年版《中国药典》一部中三七含量测定项下的方法和条件[2]，流动相曾采用不同比例的甲醇-水、乙腈-水等度洗脱，结果分离效果均不佳，且分析时间较长。后采甲醇-水、乙腈-水进行梯度洗脱，结果发现乙腈-水较甲醇-水分离效果好，也大大节省了分析时间，并能有效排除其他成分干扰，这与有关文献报道的一致[4]。实验表明，采用文中方法测定脑脉醒神胶囊中三七皂苷R1的含量重现性好，专属强，稳定可靠，方便快捷，可作为脑脉醒神胶囊的质量控制方法之一。
参考文献
[1]刘东平，杨军，丁丹. 三七及其有效成分对血液系统的药理活性研究概况[J].中医药信息，2012，29（4）：172-174.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S]. 北京：中国医药科技出版社，2015：11-12.
[3]梅全喜.简明实用中药药理手册[M]. 北京：人民卫生出版社，2009：328-331.
[4]张虹，李淑芳. 高效液相色谱法测定三七接骨丸中三七皂苷R1的含量[J].中医药临床杂志，2012，24（5）：461-462.
（编辑：梁志庆）
【关键词】脑脉醒神胶囊；三七皂苷R1；HPLC；含量测定
【中图分类号】R9141【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）21-0004-03
Determination of Notoginsenoside R1 in Naomai Xingshen Capsules by HPLC
ZHANG YuZENG Congyan*HU YuliangZHUO BinCHEN Jiancong
Affiliated Zhongshan Hospital of Guangzhou University of TCM，Zhongshan 528401 ，China
Abstract：Objective To establish a method for the determination of Notoginsenoside R1 in Naomai Xingshen Capsule and control its quanlity. Methods Separation and determination of allantoin were accessed by using an C18 column and a mobile phase of acetonitrile- water gradient elution.The flow rate was 10mL/min，temperature at 25℃ and detection wavelength at 203nm. Results The linear range was 005～03μg，r=09993，marked recovety rate was 9930%，and RSD=074%（n=6）.Conclusion The method in this paper could provide an evidence for quality control of Naomai Xingshen Capsule.
Keywords：Naomai Xingshen Capsule；Notoginsenoside R1；HPLC；Content Determination
脑脉醒神胶囊系由三七、枳实、大黄、栀子、黄芩、桃仁、丹参等十七味中药经提取加工制成的胶囊剂，具有活血化瘀、化痰开窍、通腑泻热、开窍醒脑的功效，临床用于脑外伤、中风之神昏、头晕头痛、大便秘结等。其中三七为方中主药，而三七皂苷R1又是三七中的主要活性成分之一。现代药理研究表明，三七皂苷R1能改善微循环并适度延长凝血时间，[1]是三七活血化瘀的有效成分，这与脑脉醒神胶囊活血化瘀功效一致，提示三七皂苷R1为该制剂中主要活性成分。为了更好地控制产品质量，保证临床用药安全有效，研究建立了高效液相色谱法（HPLC）测定该制剂中三七皂苷R1含量的方法现报道如下。
1仪器与材料
11仪器Agilent1260高效液相色谱仪；色谱柱：Venusil XBP C18（L）柱（250mm×46mm，5μm，Agela Technologies）。
[JP2]12材料三七皂苷R1对照品（批号：110745-200617，中国食品药品检定研究院）；脑脉醒神胶囊（批号：20140313、20150302、20160130）。乙腈为色谱纯（批号：AC-12960217，瑞典OCEANPAK公司）；甲醇为分析纯（批号：1506031，西陇化工股份有限公司）。[JP]
2方法与结果
21色谱条件以十八烷基硅烷键全硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A ，水为流动相 B，按表1的规定进行梯度洗脱；流速为10mL/min；柱温为25℃；检测波长为 203nm；进样10μL。理论板数按三七皂苷R1峰算应不低于3000。
22对照品溶液制备精密称取三七皂苷R1对照品适量，加甲醇溶解，制成每lmL含50μg的溶液，作为对照品溶液。
23供试品溶液制备取本品10粒，内容物研细，精密称取约1g，置于塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
24阴性干扰试验取缺三七阴性样品，按照“23”项下供试品溶液制备方法制备缺三七阴性样品溶液，再按“21”项下色谱条件分析，结果在与对照品保留时间相同的位置上无峰出现，表明脑脉醒神胶囊中其他成分对三七皂苷Rl的测定无干扰。见图1。
25线性范围考察精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5、6μL，进样，按“21”项下色谱条件进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，三七皂苷R1对照品进样量为横坐标。绘制标准曲线，得回归方程为Y=47218X+11542，r=09993。结果表明三七皂苷R1进样量在005～03μg之间呈良好的线性关系。
26精密度试验取同一对照品溶液按“21”项下色谱条件重复进样测定6次，三七皂苷R1峰面积的RSD为140%，结果表明精密度良好。
27重复性试验取同一批样品（批号：20160130）6份，分别按“23”项下的方法制备供试品溶液，各进样20μL，按“21”项下色谱条件进行测定，结果三七皂苷R1峰面积的RSD为120%，表明方法重现性良好。 28稳定性试验取样品（批号：20160130）适量，按“23”项下的方法制成供试品溶液，放置0、1、2、4、8、24h，分别进样20μL，按“21”项下色谱条件进行测定，结果三七皂苷R1峰面积的RSD为111%，表明样品溶液室温放置24h稳定。
29回收率试验精密称取已知含量的样品（批号：20140313）6份，分别添加三七皂苷R1对照品适量，按“23”项下的方法制成供试品溶液，各进样10μL，按“21”项下色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表2。
210样品含量测定取3个批号的样品，按 “23”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取20μL进样，测定三七皂苷R1峰面积，根据峰面积用标准曲线法计算样品含量。结果见表3。
3讨论
三七具有散瘀止血，消肿定痛的作用[2]，现代药理实验研究表明其在抗凝血、抗冠心病、扩张血管及保护脑损伤等方面作用明显[3]，是脑脉醒神胶囊处方中具有活血化瘀作用的主要药物，故建立其有效成分含量测定方法，可进一步加强对脑脉醒神胶囊的整体质量控制。实验中供试品溶液的制备方法及色谱条件均参照2015年版《中国药典》一部中三七含量测定项下的方法和条件[2]，流动相曾采用不同比例的甲醇-水、乙腈-水等度洗脱，结果分离效果均不佳，且分析时间较长。后采甲醇-水、乙腈-水进行梯度洗脱，结果发现乙腈-水较甲醇-水分离效果好，也大大节省了分析时间，并能有效排除其他成分干扰，这与有关文献报道的一致[4]。实验表明，采用文中方法测定脑脉醒神胶囊中三七皂苷R1的含量重现性好，专属强，稳定可靠，方便快捷，可作为脑脉醒神胶囊的质量控制方法之一。
参考文献
[1]刘东平，杨军，丁丹. 三七及其有效成分对血液系统的药理活性研究概况[J].中医药信息，2012，29（4）：172-174.
[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S]. 北京：中国医药科技出版社，2015：11-12.
[3]梅全喜.简明实用中药药理手册[M]. 北京：人民卫生出版社，2009：328-331.
[4]张虹，李淑芳. 高效液相色谱法测定三七接骨丸中三七皂苷R1的含量[J].中医药临床杂志，2012，24（5）：461-462.
（编辑：梁志庆）