【摘 要】
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目的 研究MLL-AF9融合基因反义寡核苷酸(ASODN)对人类急性单核细胞白血病细胞THP-1增生和凋亡的影响.方法 选择THP-1细胞特有的MLL-AF9融合基因为靶基因,设计并合成靶向MLL-AF9的ASODN及正义核苷酸(SODN),应用脂质体转染方法,将其转入细胞,RT-PCR法比较转染前后MLL-AF9 mRNA表达水平的变化,Western blotting法鉴定MLL-AF9蛋白表
【机 构】
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430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所,430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究所,430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院血液病研究
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目的 研究MLL-AF9融合基因反义寡核苷酸(ASODN)对人类急性单核细胞白血病细胞THP-1增生和凋亡的影响.方法 选择THP-1细胞特有的MLL-AF9融合基因为靶基因,设计并合成靶向MLL-AF9的ASODN及正义核苷酸(SODN),应用脂质体转染方法,将其转入细胞,RT-PCR法比较转染前后MLL-AF9 mRNA表达水平的变化,Western blotting法鉴定MLL-AF9蛋白表达量,改良MTT法检测细胞增生抑制率,并通过Hoechst33258染色观察ASODN作用于THP-1后细胞出现凋亡形态特征,流式细胞仪检测细胞凋亡水平.结果 与空白对照组、脂质体对照组和SODN组相比,ASODN组细胞中MLL-AF9表达明显降低(P＜0.01),相对应MLL-AF9蛋白水平亦明显下降,同时细胞生长受到抑制,被诱导凋亡产生凋亡小体.ASODN转染THP-1细胞0、24和48 h后,ASODN组凋亡率分别为(10.4±3.0)%、(22.8±2.5)%和(24.7±3.1)%,与对照组相比凋亡率显著增加(P＜0.01)且呈时间依赖性.结论 利用ASODN靶向沉默MLL-AF9融合基因的表达能有效抑制THP-1细胞增生并促进其凋亡。
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