微量酶标夹心杂交法定量检测人iNOS—mRNA

来源 :中国病理生理杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:very_god
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目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术,对人iNOS-mRNA进行定量检测.方法: 设计两条特异探针,其中一条为捕获探针,5'端连接氨基,能与微孔板表面的NOS 基团共价结合,"竖直"地包被在微孔中,另一个为检测探针,3'端带有生物素标记.用脂多糖(LPS)刺激人外周血单个核细胞24 h后,提取巨噬细胞总RNA,进行RT-PCR扩增,PCR产物热变性后加入到已包被捕获探针的微孔板内,并加入检测探针进行夹心杂交,最后加入亲和素-辣根过氧化物酶
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