【摘 要】
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目的 探讨脐带间充质干细胞(hU-MSC)对急性肝衰竭患者(FHF)单核细胞衍生的树突状细胞(DC)的免疫调节作用及炎性环境调节机制.方法 选取5例急性肝衰竭患者外周血DC与hU-M SC进行共培养.检测DC成熟和活化水平、调节性DC(regDC)细胞比例,细胞上清细胞因子水平.蛋白质印迹检测TLR4、IKKα与NF-κB-p65蛋白表达变化,全转录组测序分析筛选新的治疗靶点.结果 hU-MSC与DC共培养后,regDC增加,未成熟DC(imDC)表面共刺激分子M HC-II、CD80及CD86表达水平升
【机 构】
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450007 郑州市中心医院消化内科
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目的 探讨脐带间充质干细胞(hU-MSC)对急性肝衰竭患者(FHF)单核细胞衍生的树突状细胞(DC)的免疫调节作用及炎性环境调节机制.方法 选取5例急性肝衰竭患者外周血DC与hU-M SC进行共培养.检测DC成熟和活化水平、调节性DC(regDC)细胞比例,细胞上清细胞因子水平.蛋白质印迹检测TLR4、IKKα与NF-κB-p65蛋白表达变化,全转录组测序分析筛选新的治疗靶点.结果 hU-MSC与DC共培养后,regDC增加,未成熟DC(imDC)表面共刺激分子M HC-II、CD80及CD86表达水平升高,共培养后IL-1α、IL-1β和IL-6因子表达均降低,IL-1α为(754.68±22.65)pg/mL比(76.67±11.25)pg/mL;IL-1β为(336.49±55.75)pg/mL比(85.33±12.58)pg/mL;IL-6为(38027.85±5231.14)pg/mL比12000.75±6793.69)pg/mL;抑炎因子IL-10表达上调,为(0.41±0.01)pg/mL比(0.61±0.01)pg/mL;差异均有统计学意义(P<0.05).WB结果显示,hUC-MSC共培养后显著下调NF-κB-P65(0.777±0.01比0.55±0.02)与TLR4(1.12±0.01比0.54±0.01)蛋白表达,同时IKKα蛋白表达上调(0.12±0.01比0.88±0.01),NS398处理后在hUC-MSC作用基础上,下调N F-κB-p65与T L R4蛋白表达,蛋白表达量分别为0.14±0.01、0.12±0.01,均显著低于其他两组,而IK Kα蛋白表达再次显著上调,蛋白表达量为1.18±0.01,高于其他两组,差异均有统计学意义(P<0.05).全转录组测序分析结果显示,与非共培养组相比,共培养组有2127个基因上调表达,663个基因下调表达,差异表达明显的基因大多与炎症发生密切相关.结论 在急性肝衰竭中,hU-M SC能够在体外诱导imDC分化生成CD11bhigh 1alow CD11clow regDCs,表现出免疫抑制作用,从而促进hU-MSC发挥抗炎作用,其可通过TLR4/NF-κB/COX-2途径抑制炎性级联反应的产生.
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