[目的]探讨消化液、细胞数量及试剂温度对Annexin V/PI法流式细胞术检测细胞凋亡率的影响。[方法]细胞经Accutase或无EDTA胰酶消化后比较检测结果;含有0.5×10~5、1×10~5、2×10~5细胞的样本按照说明书推荐（默认含有1×10~5细胞）加入试剂后，比较检测结果;细胞加入室温或4℃试剂后比较检测结果。以上比较均用未处理细胞和秋水仙素处理细胞分别进行。[结果]对于未处理细胞而言，与无EDTA胰酶相比，Accutase能显著减少凋亡率（2.70%vs 18.05%）;而经药物处理的细胞，Accutase组凋亡率也有一定程度减少（22.32%vs 26.50%），但差异没有未处理细胞大。未处理细胞随着细胞数量的增加，PI信号并未发生明显改变，Annexin V-FITC信号与细胞数量成反比，统一十字门分析的凋亡率分别是:2.46%、1.85%、1.35%。对于药物处理的细胞差异尤其明显，统一十字门分析的凋亡率分别是:28.83%、21.27%、15.59%，因此不能用统一的十字门分析。加入4℃试剂的未处理细胞的凋亡率明显高于加入室温试剂的细胞的凋亡率（3.77%vs 8.13%），而对于药物处理的细胞，两者基本无差别（22.94%vs 22.18%）。[结论]用Annexin V/PI法流式细胞术检测细胞凋亡率时，使用Accutase消化液;样本严格计数，使细胞数符合说明书要求;使用室温试剂。