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根据pEGFP—C1序列，设计并合成一对引物，通过PCR扩增出两端各含一个同向LoxP位点的GFP表达盒，克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR—G-LoxP。通过经典同源重组方法。得到表达GFP的TK基因缺失伪狂犬病毒重组毒株S03109。该重组病毒在转染了pOG231（表达Cre重组酶）的293T细胞上连续传代，筛选得到重组病毒株S0419。荧光显微镜观察、Western blot及PCR检测结果表明，S03109感染细胞后持续表达GFP，而S0419不表达GFP。PCR证实S0419为含单个LoxP