目的:建立测定马来酸噻吗洛尔滴眼液中有关物质的方法,并对其杂质进行定性。方法:采用高效液相色谱法测定有关物质的含量,色谱柱为ACES C₁₈,流动相为甲醇与4.32 g/L辛烷磺酸钠溶液（冰醋酸调pH至3.0）的混合溶液（50∶50,V/V）-甲醇（梯度洗脱）,流速为1.0 mL/min,检测波长为295 nm,柱温为30℃,进样量为20μL。采用制备液相色谱法制备杂质纯品,色谱柱为YMC-PACK ODS-A,流动相为甲醇-0.01%三氟乙酸（40∶60,V/V）和甲醇-0.01%三氟乙酸（20∶80,V/V）,流速为8 mL/min,检测波长为295 nm,柱温为20℃,进样量为0.8 mL。采用液相色谱串联质谱法进行结构推测,色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈,流动相为甲醇-5 mmol/L甲酸铵溶液（含0.05%甲酸）（梯度洗脱）,流速为0.2 mL/min,柱温为20℃,进样量为2μL;采用电喷雾离子源,以质谱全扫描模式检测母离子,以子离子扫描模式检测碎片离子。采用氢谱、碳谱进行结构确证和推测。结果:马来酸噻吗洛尔检测质量浓度线性范围为0.501¹0.02μg/mL（r=0.999 9）;定量限为3.012 ng,检出限为1.004 ng;精密度试验的RSD为0.2%,稳定性和重复性试验的RSD均小于5%。确证了杂质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的结构,并推测了杂质Ⅳ和Ⅴ的结构。结论:该方法快速、准确、专属性好,可用于马来酸噻吗洛尔滴眼液的质量控制。