【摘 要】
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为在昆虫细胞中表达猪流行性腹泻病毒（PEDV）的S和M蛋白，并探讨S和M蛋白能否自动组装成病毒样颗粒（VLPs）分泌至培养基中，本研究构建了3种不同的重组质粒（pFastBac-S、pFastBac-M和pFastBac-S-M），转化入DH10Bac感受态细胞，经蓝白斑筛选及PCR鉴定获得重组Bacmid，通过转染昆虫细胞Sf9获得重组杆状病毒（BV-S、BV-M 和BV-S-M）。在悬浮培养的
【机 构】
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湖南农业大学动物医学院兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室兽用疫苗逆向创制湖南省工程研究中心
【基金项目】
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湖南省自然科学基金面上项目（2018JJ2177）； 湖南农业大学“双一流”建设项目（SYL2019048）；
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为在昆虫细胞中表达猪流行性腹泻病毒（PEDV）的S和M蛋白，并探讨S和M蛋白能否自动组装成病毒样颗粒（VLPs）分泌至培养基中，本研究构建了3种不同的重组质粒（pFastBac-S、pFastBac-M和pFastBac-S-M），转化入DH10Bac感受态细胞，经蓝白斑筛选及PCR鉴定获得重组Bacmid，通过转染昆虫细胞Sf9获得重组杆状病毒（BV-S、BV-M 和BV-S-M）。在悬浮培养的昆虫细胞Sf9中进行表达，表达分泌的上清通过蔗糖梯度离心进行浓缩纯化，最终获得分泌型的S-M VLPs。通过Western-blotting分析S和M蛋白的表达和分泌特性，透射电镜观察VLPs形态，间接ELISA检测VLPs与猪PEDV阳性血清的反应性，最后免疫小鼠后检验其免疫原性。结果显示，S和M蛋白均能以单独或共表达的形式（S-M）分泌至培养基中。电镜下可观察到由S-M蛋白形成的直径约为90～190 nm的VLPs。间接ELISA结果显示，S、M和S-M蛋白可与PEDV猪阳性血清发生特异性反应，免疫小鼠3次后可产生高水平特异性IgG抗体。以上结果表明，在Sf9昆虫细胞中共表达S和M蛋白可以获得分泌型S-M VLPs，并具有良好的免疫原性。
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