【摘 要】
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目的通过构建慢病毒shRNA表达载体,靶向抑制Akt2基因的表达,获得稳定干扰Akt2基因的细胞克隆,为进一步探讨Akt2的功能奠定基础。方法设计并合成针对Akt2靶基因的双链寡核苷酸
【机 构】
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四川大学华西医院呼吸内科,四川省医学院科学院四川省人民医院检验科,成都市第三人民医院呼吸内科,四川大学华西医院中西医结合科
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目的通过构建慢病毒shRNA表达载体,靶向抑制Akt2基因的表达,获得稳定干扰Akt2基因的细胞克隆,为进一步探讨Akt2的功能奠定基础。方法设计并合成针对Akt2靶基因的双链寡核苷酸序列,经退火、酶切、连接反应,将干扰序列插入pGCsil-GFP质粒,经感受态细胞转化、阳性克隆测序鉴定所插入的片段,经转染及慢病毒包装,收集浓缩病毒进行滴度测定,感染至人肺腺癌细胞A549,通过无菌流式细胞分选GFP强阳性细胞,并应用荧光定量PCR及Western-blot验证干扰效果。结果重组pGCsil-shAkt2-
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