【摘 要】
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目的:在毕赤酵母表达系统中获得巨噬细胞抑制因子(MIC-1)高效分泌表达,并鉴定其免疫活性.方法:从BeWo细胞系中提取总RNA,通过反转录PCR获得目的片段,然后将基因亚克隆人pPIC9
【机 构】
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国家人口计生委科学技术研究所,国家人口计生委科学技术研究所
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目的:在毕赤酵母表达系统中获得巨噬细胞抑制因子(MIC-1)高效分泌表达,并鉴定其免疫活性.方法:从BeWo细胞系中提取总RNA,通过反转录PCR获得目的片段,然后将基因亚克隆人pPIC9k表达载体,线性化后转化GS115酵母细胞,经G418抗性筛选获多拷贝重组子并诱导表达,PCR鉴定目的基因的整合.表达产物用Western blot鉴定生物活性.结果:经过G418筛选到34株阳性克隆,MIC-1蛋白最高表达量为6.332mg/L.结论:成功构建了MIC-1表达载体,在酵母中获得多拷贝高效表达,并且形成正
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