shRNA干扰KAP-1基因表达对胰腺癌肿瘤干细胞自我更新的影响

来源 :中华肝胆外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:numlof
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目的研究KAP-1对胰腺癌肿瘤干细胞自我更新能力的影响。方法采用免疫组织化学方法检测14例胰腺癌组织标本和配对癌旁组织标本KAP1蛋白的表达情况。PCR扩增KAP1shRNA干扰序列,克隆至pGC—LV慢病毒表达载体;双酶切及测序鉴定正确后进行慢病毒包装与滴度检测。构建成功后感染人胰腺癌细胞株Panc-1细胞48h后,通过Westernblot实验和RT—qPCR实验检测KAP-1的表达量以及该细胞系相关EMT标志蛋白波形蛋白的表达。采用悬浮法培养人胰腺癌Panc-1细胞生成肿瘤干细胞球,通过测定初代以及
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