【摘 要】
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目的 探究异丹叶大黄素（ISO）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）的保护作用及潜在机制。方法 体外培养RAW264.7细胞，采用不同浓度ISO处理细胞，CCK-8法检测细胞活力。使用200 ng/ml LPS诱导RAW264.7细胞，以ISO、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）进行干预，Western blot检测各组细胞中炎症介质白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-
【基金项目】
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天津市人民医院院级重点课题（2019YJZD003）～～；
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目的 探究异丹叶大黄素（ISO）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）的保护作用及潜在机制。方法 体外培养RAW264.7细胞，采用不同浓度ISO处理细胞，CCK-8法检测细胞活力。使用200 ng/ml LPS诱导RAW264.7细胞，以ISO、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）进行干预，Western blot检测各组细胞中炎症介质白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、P65、磷酸化P65（p-P65）、IκB、磷酸化IκB（p-IκB）、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、环氧合酶2（COX-2）、高迁移率组蛋白B1（HMGB1）以及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、P62的表达，DCFH-DA探针检测各组细胞内活性氧（ROS）的变化。采用腹腔注射LPS（15 mg/kg）方法构建小鼠ALI模型，HE染色观察各组肺组织形态的病理变化，Western blot检测各组肺组织中炎症介质和自噬相关蛋白的表达，流式细胞术检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中ROS的含量。结果 ISO可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS、COX-2、HMGB1的表达，抑制ROS的产生，促进LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1的表达，降低P62的表达，激活自噬通路（P均＜0.05）;当使用自噬抑制剂3-MA干预后可显著增加p-P65/P65、p-IκB、iNOS、COX-2、HMGB1的表达且降低IκB的表达（P均＜0.001）,并促进ROS的产生。ISO能够改善LPS诱导的ALI小鼠的肺组织病理变化，显著抑制肺组织中p-P65/P65、p-IκB、iNOS、COX-2、HMGB1的表达且促进IκB的表达（P均＜0.001）,减少BALF中ROS的含量，3-MA则会逆转ISO的保护作用。结论 ISO对LPS诱导的ALI小鼠具有保护作用，其机制可能与ISO激活巨噬细胞自噬有关。
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