【摘 要】
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目的 明确6型胶原蛋白α5(COL6A5)在肺腺癌中的表达及意义.方法 通过在线数据库及实时荧光定量PCR(qPCR)法检测COL6A5在肺腺癌细胞和组织中的表达.采用GEPIA数据库分析COL6A5的表达量与肺腺癌患者预后的相关性.生物信息学预测结合RNA甲基化免疫沉淀-实时荧光定量PCR(MeRIP-qPCR)实验检测COL6A5转录本上的m6A位点.qPCR法检测RNA去甲基酶ALKBH5在肺腺癌组织中的表达量,并分析ALKBH5与COL6A5在27例肺腺癌组织中表达的相关性.qPCR和Wester
【机 构】
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广州医科大学附属第六医院(清远市人民医院)放疗科 511518
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目的 明确6型胶原蛋白α5(COL6A5)在肺腺癌中的表达及意义.方法 通过在线数据库及实时荧光定量PCR(qPCR)法检测COL6A5在肺腺癌细胞和组织中的表达.采用GEPIA数据库分析COL6A5的表达量与肺腺癌患者预后的相关性.生物信息学预测结合RNA甲基化免疫沉淀-实时荧光定量PCR(MeRIP-qPCR)实验检测COL6A5转录本上的m6A位点.qPCR法检测RNA去甲基酶ALKBH5在肺腺癌组织中的表达量,并分析ALKBH5与COL6A5在27例肺腺癌组织中表达的相关性.qPCR和Western blot检测ALKBH5对COL6A5的抑制作用.生物信息学预测结合Transwell实验和Western blot验证COL6A5在肺腺癌中的作用.结果 在线数据库Oncomine分析显示,COL6A5在肺癌中低表达,GEPIA数据库分析显示肺腺癌组织中COL6A5 mRNA表达水平显著低于正常组织(P<0.05).qPCR结果显示,COL6A5 mRNA在27例肺腺癌组织中的表达量低于癌旁组织;与正常肺上皮细胞相比,COL6A5 mRNA在肺腺癌细胞中的表达量明显受到抑制(P<0.05).生物信息学预测结合MeRIP-qPCR实验证实,COL6A5 mRNA上存在m6A位点.肺腺癌组织中ALKBH5 mRNA的表达水平高于癌旁正常组织,且与COL6A5 mRNA表达呈负相关(r=-0.599,P<0.01).在H1299细胞中敲低ALKBH5,可显著上调COL6A5的表达.分析与COL6A5共表达的基因,结果显示COL6A5可能参与调控肺腺癌细胞上皮间质转换、止血和细胞表面相互作用等生命活动.Transwell和Western blot证实,过表达COL6A5可显著抑制H1299细胞的侵袭转移能力.结论 ALKBH5在肺腺癌中下调COL6A5,过表达COL6A5可明显抑制肺腺癌细胞的侵袭转移能力.
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