油菜RNA干扰（RNAi）文库的构建

来源 :江苏农业学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：ltzmh

【摘要】

：

为了通过构建高通量RNAi（RNA干扰）双元载体来得到油菜RNAi文库,对PCR引物设计时,在目的片段5′端和3′端分别引入合适的酶切位点序列,在3种中间载体的基础上构建高通量RNAi双元

【作者】

：

谭秀华武玉永单长民马立新

【机构】

：

滨州医学院遗传学教研室,湖北大学生命科学学院分子微生物学与基因工程实验室

【出处】

：

江苏农业学报

【发表日期】

：

2010年5期

【关键词】

：

RNAi文库构建油菜双元载体 RNA interference（RNAi） library construction oilseed rape binar

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为了通过构建高通量RNAi（RNA干扰）双元载体来得到油菜RNAi文库,对PCR引物设计时,在目的片段5′端和3′端分别引入合适的酶切位点序列,在3种中间载体的基础上构建高通量RNAi双元载体pHBMT4。该载体Bsu36Ⅰ酶切位点间的片段可被油菜的任意一种功能片段取代。载体pHBMT4含有用以检测载体功效的gus报告基因,原多克隆位点处被一个插入目标序列表达框取代,该框含有的反向重复nos终止序列可自然形成发夹环结构引发转录后水平的基因沉默（PTGS）。通过抽提的油菜总DNA与载体pHBMT4相连转化获

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