论文部分内容阅读
目的研究人肺表面活性物质相关蛋白A1(SP-A1)在大肠杆菌中的表达、产物纯化及免疫原性。方法将人SP-A1基因克隆至表达载体pGEX-2T上,分别转化至大肠杆菌JM101、JM105、JM109、XL1-blue和BL21(DE3)等不同宿主,并在不同温度中的表达,采用包涵体纯化方法及亲和层析法纯化目的蛋白,用ELISA及Westert blot初步分析SP-A1蛋白的免疫原性,融合蛋白质经凝血酶酶切分析。结果 SP-A1基因在前4种宿主中表达有完整蛋白质和不完整蛋白质,目的蛋白质分别占总蛋白的6.7%、9.8%、9.3%、14.8%;于28℃时,该基因在BL21(DE3)宿主中表达产物均为完整蛋白质,占总蛋白质的10%。经包涵体纯化和Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化,可获得纯度达95%以上的纯化蛋白。目的蛋白可被抗SP-A多克隆抗体特异识别,凝血酶作用后可切出相对分子质量为26 000的目的蛋白质片段。结论人组织特异性蛋白质SP-A1可在大肠杆菌中表达,表达产物具有良好的免疫原性。