【摘 要】
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人类诱导多能干细胞(Human induced pluripotent stem cells,hiPSCs)具有向人体多种类型细胞分化的潜能,其定向分化的运动神经元(Motor neurons,MNs)是众多运动神经元疾病的重要体外模型之一.为简化MNs的鉴定方法,通过慢病毒载体将MNs特异性启动子HB9及其控制下的红色荧光蛋白(Red fluorescent protein,RFP)基因转入hiPSCs分化而来的神经干细胞(Human neural stem cells,hNSCs),经抗生素筛选,获得
【机 构】
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广东工业大学生物医药学院,广东广州 510006;五邑大学生物科技与大健康学院,广东江门 529020;江门市大健康国际创新研究院,广东江门 529080;广东工业大学生物医药学院,广东广州 5100
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人类诱导多能干细胞(Human induced pluripotent stem cells,hiPSCs)具有向人体多种类型细胞分化的潜能,其定向分化的运动神经元(Motor neurons,MNs)是众多运动神经元疾病的重要体外模型之一.为简化MNs的鉴定方法,通过慢病毒载体将MNs特异性启动子HB9及其控制下的红色荧光蛋白(Red fluorescent protein,RFP)基因转入hiPSCs分化而来的神经干细胞(Human neural stem cells,hNSCs),经抗生素筛选,获得稳定的阳性细胞株hNSCs-HB9-RFP-Puro.而后,阳性细胞株感染过表达MNs定向分化转录因子的慢病毒LV-Ngn2-Sox 11-GFP和LV-Isll-Lhx3-Hygro,诱导MNs定向分化.诱导分化所得的细胞展现出神经元样结构,并在特异性启动子HB9的作用下表达RFP;同时也表达神经元相关标记物β微管蛋白(β-tubulin)和乙酰胆碱转移酶(Choline acetyltransferase,CHAT),鉴定为成熟的MNs.该荧光报告系统为MNs的定向分化及鉴定提供了一个更加直观的方法,有效促进了MNs在疾病模型和药物筛选等领域的广泛应用.
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