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【摘 要】目的：建立高效液相色谱法测定达格列净片的溶出度。方法：以0.1mol/L盐酸溶液900ml为溶出介质，转速为50r/min，采用反相高效液相色谱法测定达格列净片的溶出含量，色谱柱为Shimpack VP-ODS，流动相为1%冰醋酸溶液-乙腈（45∶55），检测波长为242 nm，流速为1.0 ml/min，柱温为30℃。结果：空白辅料无干扰，线性范围为4.5μg/ml～15.8μg/ml，r=0.9999（n=5），回收率在98.5%～100.7%之间，平均回收率为99.3%（RSD=0.59%，n=9）；3批样品溶出度均匀良好。结论：本文建立的溶出度测定方法准确可靠，可用于本品溶出度的测定。
【关键词】达格列净片；溶出度；高效液相色谱法
达格列净（FARXIGA）是一种高效高选择的钠-葡萄糖协同转运蛋白2（SGLT2）抑制剂，它通过减少肾脏对葡萄糖的重吸收，控制2型糖尿病人的血糖浓度。达格列净片是速释的薄膜包衣片，适用在有2型糖尿病成人中作为辅助饮食和运动改善的血糖控制，一天一次，一次10mg [1] 。2012年11月12日在欧盟上市，2014年1月8日FDA批准用于2型糖尿病的治疗。故本公司研究开发达格列净片，以增加临床治疗的选择性。并建立了溶出度的测定方法。本方法经专属性、线性、精密度、准确度等方法验证，结果表明，本方法适合本品的溶出度的测定。
1 材料
1.1 仪器
LC2010A型高效液相色谱仪（包括紫外检测器，LC-solution色谱工作站等，日本岛津公司）；XP205电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。
1.2 药品与试剂
达格列净对照品（重庆华邦制药有限公司，批号：Dap-20141101R）；达格列净片（重庆华邦制药有限公司，规格：10mg，批号：20141201、20141202、20141203）；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为去离子水。
2 方法与结果
2.1方法
2.1.1溶出度方法
采用中国药典2010年版二部附录ⅩC第二法[2]。以0.1mol/L盐酸溶液900ml为溶出介质，转速为50r/min，温度为（37±0.5）℃，取样时间为15min。
2.1.2 测定方法
采用反相高效液相法测定达格列净片的溶出度，色谱柱为Shimpack VP-ODS（150 mm×4.6 mm，5μm），流动相为1%冰醋酸溶液-乙腈（45∶55），检测波长为242nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，进样体积为20μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取达格列净对照品11.31mg，置50ml量瓶中，加55%乙腈水适量，超声使溶解，再用55%乙腈水稀释到刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密量取对照品贮备溶液1.0 ml，置20ml量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品，照上述溶出度方法依法操作，于15min时取样，过滤，作为供试品溶液。
2.2.3 空白辅料溶液的制备 取达格列净空白片，照供试品溶液的制备方法配制空白辅料溶液。
2.3 方法验证
2.3.1 专属性试验
取上述对照品溶液、供试品溶液和空白辅料溶液，按上述色谱条件进样，记录色谱图。结果表明，辅料在检测波长242nm处对达格列净的溶出度测定无干扰，本方法专属性良好。
2.3.2 线性关系试验
取上述对照品储备液，分别精密量取0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml，分别置20ml量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，即得一系列浓度（x）的线性溶液，照上述色谱条件进样测定，记录达格列净的峰面积（y）。将y与x作线性回归，得回归方程为y=47562.4x+384.3（r=0.9999）。结果表明，达格列净浓度线性范围为4.5μg/ml～15.8μg/ml，线性关系良好。
2.3.3 溶液稳定性试验
取上述供试品溶液，分别于室内放置0、4、8、12h取样，照上述的色谱方法进样测定，记录达格列净的峰面积，其峰面积的RSD=0.40%（n=4）。结果表明，供试品溶液在12h内稳定。
2.3.4 精密度试验
取样品，按上述的供试品溶液的制备方法，于15min时在同一溶出杯中取6份样，照上述色谱条件测定，记录峰面积并计算达格列净片的溶出度，6份溶出度平均值为98.5%，RSD为0.48%。本方法精密度良好。
2.3.5 回收率试验
称取空白辅料适量，共9份，分别置于25ml量瓶中，分别精密加入上述的对照品贮备液2.0ml、2.5 ml、3.0ml各3份，加溶出介質超声溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，照上述色谱条件进样测定，计算回收率。结果表明，回收率在98.5%～100.7%之间，平均回收率为99.3%，RSD=0.59%（n=9）。
2.3.6 滤膜吸附试验
取对照品溶液和供试品溶液，一份经0.45μm混合纤维膜滤过，分别弃去初滤液1、3、5、10ml，另一份采用离心，取上清液，分别照上述色谱方法进样比较峰面积，结果表明，滤膜对本品无明显吸附。
2.4 样品测定结果
2.4.1 样品批内溶出均匀度测定
取一批样品12片，按上述方法制备供试品溶液，取对照品溶液和供试品溶液照上述色谱条件进样，记录色谱图，计算每份溶出度。结果，12片的溶出度分别为98.2%、 96.5%、99.9%、100.6%、98.4%、101.3%、99.7%、98.4%、97.9%、100.7%、96.8%、101.4%，平均值为99.2%，RSD为1.7%。本品批内均匀度良好，
2.4.2 样品批间溶出度测定
取本品3批，分别按上述方法制备供试品溶液，取对照品溶液和供试品溶液照上述色谱条件进样，记录色谱图，计算每份溶出度。三批样品溶出度分别为99.2%，99.8%，98.7%。详见下表。
表2 样品批间溶出度测定结果（%）
批号 1 2 3 4 5 6 平均溶出度
20141201 98.2 96.5 99.9 100.6 98.4 101.3 99.2
20141202 99.5 100.8 98.3 101.2 97.4 101.5 99.8
20141203 97.4 96.8 99.6 99.3 98.3 100.7 98.7
3 讨论
3.1 吸收波长的选择
取本品对照品适量，用溶出介质稀释后，照紫外分光光度法在200nm～400nm波长处扫描，结果达格列净在242nm有明显吸收，可用于液相紫外检测波长，故选择242nm作为本品的检测波长。
3.2 溶出介质的选择
达格列净片是速释口服片，按BCS分类为3类，属于高溶解低渗透的药物。FDA资料显示原研厂家经过大量试验数据论证后，采用崩解时限代替溶出度测定[1]。本文照中国药典的有关规定，采用溶出度测定，因口服药物进入人体首先在胃中吸收，故采用0.1mol/L盐酸溶液作为溶出介质。本品经5min、10min、15min、30min后取样测定，结果表明本品在10min以后基本溶出。故选择15min作为本品的取样时间。
综上所述，本文建立的溶出度测定方法简便快速、准确可靠，可用于达格列净片的体外溶出质量控制。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版二部[M].北京：中国医药科技出版社.附录86-87
【关键词】达格列净片；溶出度；高效液相色谱法
达格列净（FARXIGA）是一种高效高选择的钠-葡萄糖协同转运蛋白2（SGLT2）抑制剂，它通过减少肾脏对葡萄糖的重吸收，控制2型糖尿病人的血糖浓度。达格列净片是速释的薄膜包衣片，适用在有2型糖尿病成人中作为辅助饮食和运动改善的血糖控制，一天一次，一次10mg [1] 。2012年11月12日在欧盟上市，2014年1月8日FDA批准用于2型糖尿病的治疗。故本公司研究开发达格列净片，以增加临床治疗的选择性。并建立了溶出度的测定方法。本方法经专属性、线性、精密度、准确度等方法验证，结果表明，本方法适合本品的溶出度的测定。
1 材料
1.1 仪器
LC2010A型高效液相色谱仪（包括紫外检测器，LC-solution色谱工作站等，日本岛津公司）；XP205电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。
1.2 药品与试剂
达格列净对照品（重庆华邦制药有限公司，批号：Dap-20141101R）；达格列净片（重庆华邦制药有限公司，规格：10mg，批号：20141201、20141202、20141203）；乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为去离子水。
2 方法与结果
2.1方法
2.1.1溶出度方法
采用中国药典2010年版二部附录ⅩC第二法[2]。以0.1mol/L盐酸溶液900ml为溶出介质，转速为50r/min，温度为（37±0.5）℃，取样时间为15min。
2.1.2 测定方法
采用反相高效液相法测定达格列净片的溶出度，色谱柱为Shimpack VP-ODS（150 mm×4.6 mm，5μm），流动相为1%冰醋酸溶液-乙腈（45∶55），检测波长为242nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，进样体积为20μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取达格列净对照品11.31mg，置50ml量瓶中，加55%乙腈水适量，超声使溶解，再用55%乙腈水稀释到刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密量取对照品贮备溶液1.0 ml，置20ml量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品，照上述溶出度方法依法操作，于15min时取样，过滤，作为供试品溶液。
2.2.3 空白辅料溶液的制备 取达格列净空白片，照供试品溶液的制备方法配制空白辅料溶液。
2.3 方法验证
2.3.1 专属性试验
取上述对照品溶液、供试品溶液和空白辅料溶液，按上述色谱条件进样，记录色谱图。结果表明，辅料在检测波长242nm处对达格列净的溶出度测定无干扰，本方法专属性良好。
2.3.2 线性关系试验
取上述对照品储备液，分别精密量取0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml，分别置20ml量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，即得一系列浓度（x）的线性溶液，照上述色谱条件进样测定，记录达格列净的峰面积（y）。将y与x作线性回归，得回归方程为y=47562.4x+384.3（r=0.9999）。结果表明，达格列净浓度线性范围为4.5μg/ml～15.8μg/ml，线性关系良好。
2.3.3 溶液稳定性试验
取上述供试品溶液，分别于室内放置0、4、8、12h取样，照上述的色谱方法进样测定，记录达格列净的峰面积，其峰面积的RSD=0.40%（n=4）。结果表明，供试品溶液在12h内稳定。
2.3.4 精密度试验
取样品，按上述的供试品溶液的制备方法，于15min时在同一溶出杯中取6份样，照上述色谱条件测定，记录峰面积并计算达格列净片的溶出度，6份溶出度平均值为98.5%，RSD为0.48%。本方法精密度良好。
2.3.5 回收率试验
称取空白辅料适量，共9份，分别置于25ml量瓶中，分别精密加入上述的对照品贮备液2.0ml、2.5 ml、3.0ml各3份，加溶出介質超声溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，照上述色谱条件进样测定，计算回收率。结果表明，回收率在98.5%～100.7%之间，平均回收率为99.3%，RSD=0.59%（n=9）。
2.3.6 滤膜吸附试验
取对照品溶液和供试品溶液，一份经0.45μm混合纤维膜滤过，分别弃去初滤液1、3、5、10ml，另一份采用离心，取上清液，分别照上述色谱方法进样比较峰面积，结果表明，滤膜对本品无明显吸附。
2.4 样品测定结果
2.4.1 样品批内溶出均匀度测定
取一批样品12片，按上述方法制备供试品溶液，取对照品溶液和供试品溶液照上述色谱条件进样，记录色谱图，计算每份溶出度。结果，12片的溶出度分别为98.2%、 96.5%、99.9%、100.6%、98.4%、101.3%、99.7%、98.4%、97.9%、100.7%、96.8%、101.4%，平均值为99.2%，RSD为1.7%。本品批内均匀度良好，
2.4.2 样品批间溶出度测定
取本品3批，分别按上述方法制备供试品溶液，取对照品溶液和供试品溶液照上述色谱条件进样，记录色谱图，计算每份溶出度。三批样品溶出度分别为99.2%，99.8%，98.7%。详见下表。
表2 样品批间溶出度测定结果（%）
批号 1 2 3 4 5 6 平均溶出度
20141201 98.2 96.5 99.9 100.6 98.4 101.3 99.2
20141202 99.5 100.8 98.3 101.2 97.4 101.5 99.8
20141203 97.4 96.8 99.6 99.3 98.3 100.7 98.7
3 讨论
3.1 吸收波长的选择
取本品对照品适量，用溶出介质稀释后，照紫外分光光度法在200nm～400nm波长处扫描，结果达格列净在242nm有明显吸收，可用于液相紫外检测波长，故选择242nm作为本品的检测波长。
3.2 溶出介质的选择
达格列净片是速释口服片，按BCS分类为3类，属于高溶解低渗透的药物。FDA资料显示原研厂家经过大量试验数据论证后，采用崩解时限代替溶出度测定[1]。本文照中国药典的有关规定，采用溶出度测定，因口服药物进入人体首先在胃中吸收，故采用0.1mol/L盐酸溶液作为溶出介质。本品经5min、10min、15min、30min后取样测定，结果表明本品在10min以后基本溶出。故选择15min作为本品的取样时间。
综上所述，本文建立的溶出度测定方法简便快速、准确可靠，可用于达格列净片的体外溶出质量控制。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版二部[M].北京：中国医药科技出版社.附录86-87