【摘 要】
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目的通过构建严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2（severeacuterespiratorysyndromecoronavirus2，SARS-CoV-2）S1蛋白与通用型辅助性T淋巴细胞表位（panHLADR-bindingepitope，PADRE）融合的DNA疫苗，探讨PADRE对S1蛋白DNA疫苗诱导抗体水平的影响。方法以pJW4303质粒为载体分别构建表达S1蛋白的重组质粒（pJW4303
【机 构】
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佳木斯大学基础医学院微生态-免疫调节网络与相关疾病重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81971559）； 黑龙江省卫生健康委课题（20210202070029）；
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目的通过构建严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2（severeacuterespiratorysyndromecoronavirus2，SARS-CoV-2）S1蛋白与通用型辅助性T淋巴细胞表位（panHLADR-bindingepitope，PADRE）融合的DNA疫苗，探讨PADRE对S1蛋白DNA疫苗诱导抗体水平的影响。方法以pJW4303质粒为载体分别构建表达S1蛋白的重组质粒（pJW4303-S1）、表达S1和PADRE融合蛋白的重组质粒（pJW4303-S1-PADRE）。以人源密码子优化的SARS-CoV-2刺突蛋白基因为模板设计引物，PCR扩增获得基因片段，并将其克隆入真核表达载体pJW4303。对pJW4303-S1、pJW4303-S1-PADRE进行PCR扩增和酶切，产物通过琼脂糖凝胶电泳验证，并将重组质粒进行测序。构建正确的质粒转染293T细胞，Westernblot验证蛋白体外表达情况。以C57BL/6小鼠为实验动物并分组，采用不同的免疫接种策略进行动物免疫，每次免疫间隔2周，免疫前采血，第6次免疫后2周处死小鼠并采血。通过ELISA检测不同免疫策略诱导的针对SARS-CoV-2S蛋白受体结合域（receptorbindingdomain，RBD）的特异性抗体水平及其亲合力指数。结果 PCR扩增和酶切产物的琼脂糖凝胶电泳结果及质粒测序结果表明质粒构建成功；Westernblot结果表明这2个质粒可以在体外稳定表达S1蛋白、S1融合PADRE蛋白；ELISA结果显示，pJW4303-S1、pJW4303-S1-PADRE单次免疫均可以诱导产生明显的针对RBD的抗体水平（P＜0.0001，P=0.0034）。不同的免疫策略在进行6次免疫后，针对RBD的特异性抗体水平在各组间差异无统计学意义（P＞0.05）。抗体亲合力检测结果显示，第6次免疫后不同免疫策略诱导的针对RBD的抗体亲合力指数差异也无统计学意义（P＞0.05）。结论 pJW4303-S1、pJW4303-S1-PADRE均具有较强的体液免疫原性，但PADRE不能进一步提高S1蛋白DNA疫苗的体液免疫原性。
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