【摘 要】
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目的:探讨针对fas的siRNA对大鼠原位肝移植供肝冷保存和缺血再灌注损伤的拮抗作用及机制.方法:(1)化学合成针对大鼠fax基因的3对siRNA,转染大鼠正常肝细胞(BRL细胞),筛选抑制
【机 构】
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中山大学附属第三医院,中山大学达安基因诊断中心
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目的:探讨针对fas的siRNA对大鼠原位肝移植供肝冷保存和缺血再灌注损伤的拮抗作用及机制.方法:(1)化学合成针对大鼠fax基因的3对siRNA,转染大鼠正常肝细胞(BRL细胞),筛选抑制效果最高的siRNA序列.(2)对SD大鼠用水压注射法转染fas siRNA,48 h后取肝,供肝冷保存2、4、6 h后行细胞凋亡指数及fas表达检测.(3)对照组、fas siRNA组各25对SD雄性大鼠,供肝冷保存3 h后行原位肝移植,再灌注后1、3、6、12和24 h每组各处死5只大鼠,查血谷丙转氨酶(ALT);取供肝查fas mRNA表达、Fas蛋白水平和细胞凋亡计数.结果:315位点的siRNA抑制BRL细胞fas基因效率最高.供肝冷保存实验中,fas siRNA组冷保存2、4、6 h的肝脏fas表达与细胞凋亡指数低于对照组(P＜0.01).大鼠肝移植复流后,fas siRNA组各检测点的,fas基因表达、蛋白水平均明显低于、凋亡细胞少于、血清ALT低于对照组.结论:针对fas的siRNA对大鼠肝移植中的供肝冷保存和缺血再灌注损伤有一定的拮抗作用.
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