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目的
制备抗CMV早晚期抗原单克隆抗体并在病毒培养物鉴定中初步应用。
方法CMV感染MRC-5细胞24h、48h和72h后甲醛灭活的可溶性抗原免疫BALB/c小鼠，小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞NS-1进行融合。酶免法筛查阳性杂交瘤并有限性稀释法进行克隆。免疫荧光及印迹对筛选后的克隆进行鉴定，最终获得的杂交瘤制备腹水并使用Protein G进行纯化。纯化后单抗应用于CAP室间质评标本以及临床标本CMV培养物的鉴定。
结果3只小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合后初步筛查出约110株阳性克隆。剔除与其它抗原有交叉反应、抗体效价低、非全覆盖早晚期抗原的克隆最终获得抗CMV单抗杂交瘤1株，即23B5-1。免疫荧光显示23B5-1株单抗与CMV感染后3h-120h的MRC-5细胞均反应，即覆盖即刻、早期和晚期抗原。免疫印迹试验显示23B5-1株单抗与CMV抗原25KD-50KD之间的5个蛋白条带结合。23B5-1株单抗免疫球蛋白亚型为IgG1。Protein G纯化腹水后的单抗效价≥1:12800。纯化单抗染色鉴定6份室间质评及10份临床标本CMV培养物全部符合。
结论初步应用显示制备的抗CMV早晚期抗原单克隆抗体性能良好。