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[摘要] 目的 研究虎金丸对肝纤维化大鼠Nrf2/Bach1蛋白表达的影响，初步探讨虎金丸调整机体氧化应激抗肝纤维化的作用机制。 方法 以CCl4诱导肝纤维化大鼠动物模型，采用Masson胶原染色肝脏纤维化，分光光度法检测SOD、GSH-Px含量，免疫组化法测检Nrf2、Bach1的蛋白量。 结果 从Masson染色得出，虎金丸能减轻CCL4所致的肝纤维化，显著降低胶原纤维面密度；与模型组比较，虎金丸组SOD、GSH等抗氧化酶的含量显著升高（P<0.01）；虎金丸药物的使用显著降低了肝细胞组织匀浆中Nrf2的表达水平、提高了Bach1的表达水平（P<0.01）。 结论 虎金丸可调控肝细胞组织匀浆中Nrf2/Bach1蛋白的表达，促进机体氧化应激的调整与抗肝纤维化。
[关键词] 虎金丸；肝纤维化；Nrf2；Bach1
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）18-26-04
在肝纤维化的发生发展中，氧化应激起着重要作用，机体氧化/抗氧化的失衡，是肝脏炎症及肝纤维化的发展重要因素之一。核因子相关因子2（NF-E2-related factor 2，Nrf2）、转录因子Bach1（BTB and CNChomology1）在机体氧化/抗氧化失衡的调节中起着重要的作用，Nrf2通过调节肝脏抗氧化酶基因的表达增加肝脏抵抗氧化应激的能力；Bach1为Nrf2的阻遏剂，和Nrf2竞争ARE下调抗氧化酶基因的表达[1-4]。
虎金丸由虎杖、郁金、田七、灵芝、泽泻、山楂6味组成，具有活血化瘀、益气行滞的功效。临床上用于治疗肝纤维化有较好的疗效[5]。研究表明虎金丸能保护CCl4所致大鼠肝细胞急性损伤，具有确切的抗肝纤维化作用[6]。本研究采用CCl4诱导的大鼠肝纤维化，观察虎金丸对肝纤维化大鼠Nrf2/Bach1蛋白表达的影响，初步探讨虎金丸调整机体氧化应激抗肝纤维化的作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物
SD雄性大鼠，SPF级，体重150～180g，购自广州中医药大学实验动物中心，生产许可证号SCXK（粤）2008-0020。
1.2 药物及试剂
虎金丸供试液系按处方比例各药材加水煎煮2次，过滤，浓缩为含生药1g/mL，临用时稀释备用；阳性对照药水飞蓟素（陕西森弗高科实业有限公司）；四氯化碳（广州光华化学厂有限公司，批号20110930）；MDA、SOD、GSH-Px检测试剂盒（南京建成生物研究所）；兔抗Nrf2多克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司，规格1mg/mL），兔抗Bach1多克隆抗体（武汉三鹰生物技术有限公司，规格37μg/150μL）。Elevision plus免疫组化试剂盒（福州迈新生物技术开发公司）；Masson三色染色液（广州威佳科技有限公司，批号20110315）；苏木素和伊红（Sigma进口分装，批号20110211）。
1.3 仪器
7080型日立全自动生化分析仪器株式会社日立高新技术）；UV-754紫外可见分光光度计（上海科学精密仪器有限公司）；TG-16-WS台式高速离心机（长沙湘仪离心机器有限公司）；体重计，大连星海电子衡器有限公司；MIAS图像分析系统（广州中医药大学一附院病理室）；MSHOT数码成像系统（广州市明美光电技术有限公司）。
1.4 造模及给药方法
雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟素组、虎金丸组，每组10只。模型组和给药组皮下注射40% CCl4花生油溶液（将CCl4与花生油以4∶6配成40%油剂），首次0.5mL/100g，随后0.3mL/100g，隔天1次，持续6周。正常组皮下注射等体积的花生油，时间与模型组相同。造模结束后，给药组灌胃相应药物，每日1次，共4周。模型组、正常组灌胃等体积的蒸馏水。为了防止肝脏自然修复对实验结果的影响，除正常对照组外，各用药组开始给药后仍同时每周注射40% CCl4油剂0.3mL/100g体质量1次[7]。
1.5 采集标本
末次给药前禁食不禁水12h，末次给药后1h，用1%戊巴比妥钠麻醉大鼠，腹主动脉采集血液，将血液室温静置2h后，2500r/min，离心20min，取上清，-80℃保存备用。采集血液后将动物处死取肝脏标本，置于冰0.9%氯化钠溶液中充分洗涤后，称重，取肝右叶标本1cm×1cm×0.5cm，用10%（v/v）的中性甲醛固定，制备石蜡切片。取肝左叶用生理盐水制成10%的肝匀浆。
1.6 检测指标及方法
1.6.1 肝脏组织病理学观察 肝组织病理学检查采用胶原纤维染色（Masson法），在光镜下观察大鼠肝组织肝纤维化程度并拍照。MIAS医学图像分析管理系统分析并自动计算胶原纤维面密度。
1.6.2 分光光度法检测 检测肝组织匀浆中SOD、GSH-Px含量
1.6.3 免疫组化法检测肝组织匀浆Nrf2、Bach1的蛋白量的差异 肝组织标本经10%甲醛液固定，石蜡包埋，4μm连续切片贴于经APES处理的载玻片。免疫组化按Elevision plus试剂盒要求操作。PBS代替一抗作为阴性对照。用MSHOT数码成像系统采集图像，MIAS医学图像分析管理系统分析并自动计算平均光密度。
1.7 统计学处理
所有计量数据以（）表示，SPSS11.7统计软件进行统计分析。二组间数据比较用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Masson染色胶原纤维观察
正常组肝组织形态结构正常，除肝中央静脉周和肝血窦周见少量的网状纤维，无明显胶原纤维增生。模型组肝组织结构被破坏，肝索排列紊乱，局部的网状纤维融合形成胶原纤维条索，使肝小叶中央区和汇管区的纤维间隔相互连接，改建肝小叶结构和血液循环形成了假小叶。肝组织损伤减轻，肝索排列整齐，胶原纤维增生显著减少。 在Masson染色中，纤维蛋白呈黄绿色，运用MIAS医学图像分析管理系统分析胶原纤维的面密度，根据面密度值判断大鼠纤维化的程度。与正常组比较，模型组的面密度显著增大（P<0.01），面密度值为（0.206±0.059）。与模型组比较，水飞蓟素与虎金丸均能显著减低纤维蛋白的含量（P<0.01），且虎金丸的作用更显著。见表1。
2.2 大鼠肝组织匀浆中GSH-Px与SOD含量的变化
与正常组相比，模型组的抗氧化酶GSH-Px与SOD含量均显著降低（P<0.01）；与模型组比较，两药物组均使GSH-Px与SOD含量显著升高（P<0.01），表明药物的使用增强了机能的抗氧化酶含量，达到了保护肝脏的作用。见表2。
2.3 大鼠肝组织匀浆Nrf2、Bach1蛋白的改变
与正常组比较，模型组肝细胞浆中的Nrf2蛋白显著升高（P<0.01），Bach1蛋白显著降低（P<0.01）。见图2：A1、A2、B1、B2。与模型组比较，虎金丸、水飞蓟素组肝细胞胞浆中的Nrf2蛋白显著降低，Bach1蛋白显著增高（P<0.01）。见图2：C1、C2、D1、D2。两组之间的蛋白水平差异小。见表3。
3 讨论
肝纤维化是各种肝损伤的共同的终末阶段。正常的肝纤维结缔组织的生成与分解保持动态平衡，当肝组织受到不同损伤时（如药物性、酒精性损伤），肝纤维组织弥漫增生大
于分解，导致肝纤维化[8]。研究表明，虎金丸对诱导的大鼠肝纤维化有较好治疗作用，能够保护肝细胞，抑制胶原纤维增生，其机理与抗脂质过氧化有关[9]。现代药理研究表明，虎杖鞣质具有较好的抗脂质过氧化的作用[10]，郁金主要有效成分姜黄素通过清除自由基、抑制脂质过氧化反应发挥其抗氧化活性[11]，田七中的三七总皂苷抑制脂质过氧化反应[12]，灵芝的主要活性成分灵芝多糖、泽泻总提物、山楂提取物均具有抗氧化作用[13-15]。
CCl4是最经典和广泛应用的肝毒性物质，一般认为CCl4在肝细胞内经微粒体酶活化生成自由基，启动脂质过氧化，造成肝损伤与纤维化[16]。从Masson染色结果来看，模型大鼠肝脏组织出现结构破坏、肝索紊乱、胶原纤维增生与假小叶等肝纤维化现象，而虎金丸能改善肝纤维化，降低胶原纤维面密度。
机体受到氧化应激损伤后，细胞浆中Bach1核移位进入细胞核内和Nrf2竞争ARE，Nrf2出核降解，细胞浆中Nrf2水平增加，抗氧化酶的表达水平下降。抗氧化处理时，细胞浆中Nrf2进入细胞核，与抗氧化反应元件（ARE）结合，上调抗氧化酶的表达，Bach1的核移出，细胞浆中Bach1水平增加[17-18]。实验表明，模型组肝细胞组织匀浆中的Nrf2表达显著高于正常组，Bach1则显著低于正常组，SOD、GSH-Px等抗氧化酶的表达的水平与活性低于正常组，提示在氧化应激过程中Nrf2核移出，机体抗氧化酶水平降低。在药物组中，抗氧化药物的使用使机体的氧化/抗氧化失衡得到了调节，肝细胞组织匀浆中Nrf2水平回落，细胞浆中Bach1水平提高，SOD、GSH-Px等抗氧化酶的表达的水平与活性也得到了提高。这说明虎金丸可调控Nrf2/Bach1蛋白在肝细胞组织匀浆中的表达，通过核因子水平的变化调整SOD、GSH-Px等抗氧化酶的含量与活性，从而达到调整氧化应激抗肝纤维化的作用。
[参考文献]
[1] Florczyk U，Loboda A，Stachurska A，et al.Role of Nrf2 transcription factor in cellular response to oxidative stress[J].Postepy Biochem，2010，56（2）：147.
[2] Kalra S，Zhang Y，Knatko EV，et al.Oral Azathioprine Leads to HigherIncorporation of 6-Thioguanine in DNA of Skin than Liver：The protective role of the Keap1/Nrf2/ARE pathway[J].Cancer Prev Res，2011，4（10）：1665.
[3] Igarashi K，Sun J.The heme-bach1 pathway in the regulation of oxidative stress response and erythroid differentiation[J].Antioxid Redox Signal，2006，8（1-2）：107.
[4] Reichard JF，Motz GT，Puga A.Heme oxygenase-1 induction by NRF2 requires inactivation of the transcriptional repressor BACH1[J].Nucleic Acids Res，2007，35（21）：7074.
[5] 黄张杰，施旭光，黄嫚婷，等.虎金颗粒对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1表达的影响[J].中药材，2013，1（36）：106.
[6] 施旭光，黄兆胜，吕健，等.虎金颗粒对免疫性肝纤维化大鼠肝功能和肝纤指标的影响[J].浙江中医药大学学报，2010，34（1）：62.
[7] 陈奇.中药药效研究思路与方法[M].北京：人民卫生出版社，2005：510.
[8] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].第3版.北京：人民卫生出版社，2006：1350.
[9] 黄兆胜，赵珍东，罗绮珊，等.虎金颗粒抗肝纤维化的实验研究[J].中成药，2005，27（2）：227.
[10] 曾伟成，蔡钦榕，杨辉，等.虎杖鞣质抗脂质过氧化作用研究[J].中药药理与临床，2002（6）：18.
[11] 田雪琪，田凯，陈朝银，等.姜黄素类似物的抗氧化活性及其构效关系研究进展[J].云南中医学院学报，2013（1）：94.
[12] 郭洁文，邓志军，符永恒，等.三七总皂苷对心梗后心室重构大鼠增强抗氧化与改善心肌形态学作用[J].中山大学学报（自然科学版），2008（2）：140.
[13] 付涛，姜淋洁，陈桂林，等.泽泻汤降血脂及抗氧化作用有效部位的研究[J].时珍国医国药，2012（2）：266.
[14] 刘佳，王勇.灵芝多糖的研究进展[J].现代药物与临床，2012（6）：629.
[15] 李晓梅，郭曙光，康文艺.山楂提取物的体外和体内抗氧化作用[J].精细化工，2009（4）：348.
[16] 陈金锋，高家荣，姜辉，等.肝纤维化动物模型研究进展[J].安徽中医学院学报，2012（6）：83.
[17] Gerasimos P.Sykiotis，Dirk Bohmann.Stress-activated cap’n’collar Transcription Factors in aging and human disease[J].Sci Signal，2010，3（112）：3112.
[18] 王豫萍，程明亮.Nrf2-Keap1抗氧化系统与肝脏疾病[J].世界华人消化杂志，2010，18（18）：1907.
（收稿日期：2013-07-25）
[关键词] 虎金丸；肝纤维化；Nrf2；Bach1
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2013）18-26-04
在肝纤维化的发生发展中，氧化应激起着重要作用，机体氧化/抗氧化的失衡，是肝脏炎症及肝纤维化的发展重要因素之一。核因子相关因子2（NF-E2-related factor 2，Nrf2）、转录因子Bach1（BTB and CNChomology1）在机体氧化/抗氧化失衡的调节中起着重要的作用，Nrf2通过调节肝脏抗氧化酶基因的表达增加肝脏抵抗氧化应激的能力；Bach1为Nrf2的阻遏剂，和Nrf2竞争ARE下调抗氧化酶基因的表达[1-4]。
虎金丸由虎杖、郁金、田七、灵芝、泽泻、山楂6味组成，具有活血化瘀、益气行滞的功效。临床上用于治疗肝纤维化有较好的疗效[5]。研究表明虎金丸能保护CCl4所致大鼠肝细胞急性损伤，具有确切的抗肝纤维化作用[6]。本研究采用CCl4诱导的大鼠肝纤维化，观察虎金丸对肝纤维化大鼠Nrf2/Bach1蛋白表达的影响，初步探讨虎金丸调整机体氧化应激抗肝纤维化的作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物
SD雄性大鼠，SPF级，体重150～180g，购自广州中医药大学实验动物中心，生产许可证号SCXK（粤）2008-0020。
1.2 药物及试剂
虎金丸供试液系按处方比例各药材加水煎煮2次，过滤，浓缩为含生药1g/mL，临用时稀释备用；阳性对照药水飞蓟素（陕西森弗高科实业有限公司）；四氯化碳（广州光华化学厂有限公司，批号20110930）；MDA、SOD、GSH-Px检测试剂盒（南京建成生物研究所）；兔抗Nrf2多克隆抗体（北京博奥森生物技术有限公司，规格1mg/mL），兔抗Bach1多克隆抗体（武汉三鹰生物技术有限公司，规格37μg/150μL）。Elevision plus免疫组化试剂盒（福州迈新生物技术开发公司）；Masson三色染色液（广州威佳科技有限公司，批号20110315）；苏木素和伊红（Sigma进口分装，批号20110211）。
1.3 仪器
7080型日立全自动生化分析仪器株式会社日立高新技术）；UV-754紫外可见分光光度计（上海科学精密仪器有限公司）；TG-16-WS台式高速离心机（长沙湘仪离心机器有限公司）；体重计，大连星海电子衡器有限公司；MIAS图像分析系统（广州中医药大学一附院病理室）；MSHOT数码成像系统（广州市明美光电技术有限公司）。
1.4 造模及给药方法
雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟素组、虎金丸组，每组10只。模型组和给药组皮下注射40% CCl4花生油溶液（将CCl4与花生油以4∶6配成40%油剂），首次0.5mL/100g，随后0.3mL/100g，隔天1次，持续6周。正常组皮下注射等体积的花生油，时间与模型组相同。造模结束后，给药组灌胃相应药物，每日1次，共4周。模型组、正常组灌胃等体积的蒸馏水。为了防止肝脏自然修复对实验结果的影响，除正常对照组外，各用药组开始给药后仍同时每周注射40% CCl4油剂0.3mL/100g体质量1次[7]。
1.5 采集标本
末次给药前禁食不禁水12h，末次给药后1h，用1%戊巴比妥钠麻醉大鼠，腹主动脉采集血液，将血液室温静置2h后，2500r/min，离心20min，取上清，-80℃保存备用。采集血液后将动物处死取肝脏标本，置于冰0.9%氯化钠溶液中充分洗涤后，称重，取肝右叶标本1cm×1cm×0.5cm，用10%（v/v）的中性甲醛固定，制备石蜡切片。取肝左叶用生理盐水制成10%的肝匀浆。
1.6 检测指标及方法
1.6.1 肝脏组织病理学观察 肝组织病理学检查采用胶原纤维染色（Masson法），在光镜下观察大鼠肝组织肝纤维化程度并拍照。MIAS医学图像分析管理系统分析并自动计算胶原纤维面密度。
1.6.2 分光光度法检测 检测肝组织匀浆中SOD、GSH-Px含量
1.6.3 免疫组化法检测肝组织匀浆Nrf2、Bach1的蛋白量的差异 肝组织标本经10%甲醛液固定，石蜡包埋，4μm连续切片贴于经APES处理的载玻片。免疫组化按Elevision plus试剂盒要求操作。PBS代替一抗作为阴性对照。用MSHOT数码成像系统采集图像，MIAS医学图像分析管理系统分析并自动计算平均光密度。
1.7 统计学处理
所有计量数据以（）表示，SPSS11.7统计软件进行统计分析。二组间数据比较用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Masson染色胶原纤维观察
正常组肝组织形态结构正常，除肝中央静脉周和肝血窦周见少量的网状纤维，无明显胶原纤维增生。模型组肝组织结构被破坏，肝索排列紊乱，局部的网状纤维融合形成胶原纤维条索，使肝小叶中央区和汇管区的纤维间隔相互连接，改建肝小叶结构和血液循环形成了假小叶。肝组织损伤减轻，肝索排列整齐，胶原纤维增生显著减少。 在Masson染色中，纤维蛋白呈黄绿色，运用MIAS医学图像分析管理系统分析胶原纤维的面密度，根据面密度值判断大鼠纤维化的程度。与正常组比较，模型组的面密度显著增大（P<0.01），面密度值为（0.206±0.059）。与模型组比较，水飞蓟素与虎金丸均能显著减低纤维蛋白的含量（P<0.01），且虎金丸的作用更显著。见表1。
2.2 大鼠肝组织匀浆中GSH-Px与SOD含量的变化
与正常组相比，模型组的抗氧化酶GSH-Px与SOD含量均显著降低（P<0.01）；与模型组比较，两药物组均使GSH-Px与SOD含量显著升高（P<0.01），表明药物的使用增强了机能的抗氧化酶含量，达到了保护肝脏的作用。见表2。
2.3 大鼠肝组织匀浆Nrf2、Bach1蛋白的改变
与正常组比较，模型组肝细胞浆中的Nrf2蛋白显著升高（P<0.01），Bach1蛋白显著降低（P<0.01）。见图2：A1、A2、B1、B2。与模型组比较，虎金丸、水飞蓟素组肝细胞胞浆中的Nrf2蛋白显著降低，Bach1蛋白显著增高（P<0.01）。见图2：C1、C2、D1、D2。两组之间的蛋白水平差异小。见表3。
3 讨论
肝纤维化是各种肝损伤的共同的终末阶段。正常的肝纤维结缔组织的生成与分解保持动态平衡，当肝组织受到不同损伤时（如药物性、酒精性损伤），肝纤维组织弥漫增生大
于分解，导致肝纤维化[8]。研究表明，虎金丸对诱导的大鼠肝纤维化有较好治疗作用，能够保护肝细胞，抑制胶原纤维增生，其机理与抗脂质过氧化有关[9]。现代药理研究表明，虎杖鞣质具有较好的抗脂质过氧化的作用[10]，郁金主要有效成分姜黄素通过清除自由基、抑制脂质过氧化反应发挥其抗氧化活性[11]，田七中的三七总皂苷抑制脂质过氧化反应[12]，灵芝的主要活性成分灵芝多糖、泽泻总提物、山楂提取物均具有抗氧化作用[13-15]。
CCl4是最经典和广泛应用的肝毒性物质，一般认为CCl4在肝细胞内经微粒体酶活化生成自由基，启动脂质过氧化，造成肝损伤与纤维化[16]。从Masson染色结果来看，模型大鼠肝脏组织出现结构破坏、肝索紊乱、胶原纤维增生与假小叶等肝纤维化现象，而虎金丸能改善肝纤维化，降低胶原纤维面密度。
机体受到氧化应激损伤后，细胞浆中Bach1核移位进入细胞核内和Nrf2竞争ARE，Nrf2出核降解，细胞浆中Nrf2水平增加，抗氧化酶的表达水平下降。抗氧化处理时，细胞浆中Nrf2进入细胞核，与抗氧化反应元件（ARE）结合，上调抗氧化酶的表达，Bach1的核移出，细胞浆中Bach1水平增加[17-18]。实验表明，模型组肝细胞组织匀浆中的Nrf2表达显著高于正常组，Bach1则显著低于正常组，SOD、GSH-Px等抗氧化酶的表达的水平与活性低于正常组，提示在氧化应激过程中Nrf2核移出，机体抗氧化酶水平降低。在药物组中，抗氧化药物的使用使机体的氧化/抗氧化失衡得到了调节，肝细胞组织匀浆中Nrf2水平回落，细胞浆中Bach1水平提高，SOD、GSH-Px等抗氧化酶的表达的水平与活性也得到了提高。这说明虎金丸可调控Nrf2/Bach1蛋白在肝细胞组织匀浆中的表达，通过核因子水平的变化调整SOD、GSH-Px等抗氧化酶的含量与活性，从而达到调整氧化应激抗肝纤维化的作用。
[参考文献]
[1] Florczyk U，Loboda A，Stachurska A，et al.Role of Nrf2 transcription factor in cellular response to oxidative stress[J].Postepy Biochem，2010，56（2）：147.
[2] Kalra S，Zhang Y，Knatko EV，et al.Oral Azathioprine Leads to HigherIncorporation of 6-Thioguanine in DNA of Skin than Liver：The protective role of the Keap1/Nrf2/ARE pathway[J].Cancer Prev Res，2011，4（10）：1665.
[3] Igarashi K，Sun J.The heme-bach1 pathway in the regulation of oxidative stress response and erythroid differentiation[J].Antioxid Redox Signal，2006，8（1-2）：107.
[4] Reichard JF，Motz GT，Puga A.Heme oxygenase-1 induction by NRF2 requires inactivation of the transcriptional repressor BACH1[J].Nucleic Acids Res，2007，35（21）：7074.
[5] 黄张杰，施旭光，黄嫚婷，等.虎金颗粒对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1表达的影响[J].中药材，2013，1（36）：106.
[6] 施旭光，黄兆胜，吕健，等.虎金颗粒对免疫性肝纤维化大鼠肝功能和肝纤指标的影响[J].浙江中医药大学学报，2010，34（1）：62.
[7] 陈奇.中药药效研究思路与方法[M].北京：人民卫生出版社，2005：510.
[8] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].第3版.北京：人民卫生出版社，2006：1350.
[9] 黄兆胜，赵珍东，罗绮珊，等.虎金颗粒抗肝纤维化的实验研究[J].中成药，2005，27（2）：227.
[10] 曾伟成，蔡钦榕，杨辉，等.虎杖鞣质抗脂质过氧化作用研究[J].中药药理与临床，2002（6）：18.
[11] 田雪琪，田凯，陈朝银，等.姜黄素类似物的抗氧化活性及其构效关系研究进展[J].云南中医学院学报，2013（1）：94.
[12] 郭洁文，邓志军，符永恒，等.三七总皂苷对心梗后心室重构大鼠增强抗氧化与改善心肌形态学作用[J].中山大学学报（自然科学版），2008（2）：140.
[13] 付涛，姜淋洁，陈桂林，等.泽泻汤降血脂及抗氧化作用有效部位的研究[J].时珍国医国药，2012（2）：266.
[14] 刘佳，王勇.灵芝多糖的研究进展[J].现代药物与临床，2012（6）：629.
[15] 李晓梅，郭曙光，康文艺.山楂提取物的体外和体内抗氧化作用[J].精细化工，2009（4）：348.
[16] 陈金锋，高家荣，姜辉，等.肝纤维化动物模型研究进展[J].安徽中医学院学报，2012（6）：83.
[17] Gerasimos P.Sykiotis，Dirk Bohmann.Stress-activated cap’n’collar Transcription Factors in aging and human disease[J].Sci Signal，2010，3（112）：3112.
[18] 王豫萍，程明亮.Nrf2-Keap1抗氧化系统与肝脏疾病[J].世界华人消化杂志，2010，18（18）：1907.
（收稿日期：2013-07-25）