【摘 要】
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目的:探讨let-7b-5p下调FTO并通过m6A/MYC信号通路抑制急性髓系白血病细胞系THP-1增殖的作用.方法:选取急性髓系白血病细胞系THP-1及正常人外周血单个核细胞(PBMNC)为研究对
【机 构】
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福建省立医院,福建医科大学附属省立临床学院,福建福州350001
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目的:探讨let-7b-5p下调FTO并通过m6A/MYC信号通路抑制急性髓系白血病细胞系THP-1增殖的作用.方法:选取急性髓系白血病细胞系THP-1及正常人外周血单个核细胞(PBMNC)为研究对象,采用RT-PCR检测细胞中let-7b-5p及FTO mRNA表达;Western blot检测细胞中FTO蛋白表达;采用荧光素酶报告基因实验验证let-7b-5p对FTO的靶向作用.分别采用let-7b-5p mimic转染THP-1细胞和let-7b-5p inhibitor转染PBMNC,采用m6A斑点印迹分析转染后的c-MYC mRNA m6A富集水平变化,RT-PCR分析转染细胞let-7b-5p、FTO与c-MYC mR-NA表达水平变化,Western blot进一步验证FTO、c-MYC表达,验证let-7b-5p对FTO表达的影响;采用MTT法检测转染后细胞的增殖水平.结果:与PBMNC比较,THP-1的let-7b-5p表达显著降低,而FTO表达明显增高,差异显著(P＜0.05);let-7b-5p mimic联合FTO 3'-UTR使转染的THP-1细胞荧光素酶活性显著降低,而联合3'-UTR结合位点突变使转染的THP-1细胞荧光素酶活性显著增高,与阴性对照组的差异显著(P＜0.05).let-7b-5p inhibitor下调c-MYC mRNA m6A富集水平,上调PBMNC表达FTO,差异显著(P＜0.05);然而,let-7b-5p mimic上调c-MYCmRNA m6A富集水平,下调THP-1表达FTO,细胞增殖率显著降低,与空载体组(阴性对照组)差异显著(P＜0.05).结论:人急性髓系白血病细胞系THP-1低表达let-7b-5p,通过let-7b-5 p-/FTO-/m6A轴调节c-MYC表达,进而促进白血病细胞增殖.
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