【摘 要】
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目的 探讨米诺地尔在大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞衰老过程中的作用及其相关分子机制.方法 体外培养大鼠原代胸主动脉血管平滑肌细胞,随机分为对照组、衰老组[2 μmol/L血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导血管平滑肌细胞]、药物组(2 μmol/L Ang Ⅱ+1 mmol/L米诺地尔处理血管平滑肌细胞).采用β半乳糖苷酶染色检测各组细胞衰老水平,运用CCK-8检测各组细胞增殖情况,Western blot法检测细胞衰老相关蛋白P53、P16、P21、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-
【机 构】
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430060 武汉大学人民医院心内科武汉大学心血管病研究所心血管病湖北省重点实验室
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目的 探讨米诺地尔在大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞衰老过程中的作用及其相关分子机制.方法 体外培养大鼠原代胸主动脉血管平滑肌细胞,随机分为对照组、衰老组[2 μmol/L血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导血管平滑肌细胞]、药物组(2 μmol/L Ang Ⅱ+1 mmol/L米诺地尔处理血管平滑肌细胞).采用β半乳糖苷酶染色检测各组细胞衰老水平,运用CCK-8检测各组细胞增殖情况,Western blot法检测细胞衰老相关蛋白P53、P16、P21、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)及信号通路相关蛋白腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK和沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白表达,用相应试剂盒检测各组细胞内细胞氧化应激指标活性氧(ROS)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 与对照组比较,衰老组细胞染色阳性率明显增高[(48.30±2.48)％vs(3.89±1.03)％],A 值(1.64±0.17vs2.41±0.26)明显降低(P＜0.05),P53蛋白、P16蛋白、P21 蛋白、VCAM-1、ICAM-1表达显著增加(P＜0.05),ROS荧光强度明显增加,CAT、SOD活性明显降低(P＜0.05),磷酸化AMPK和SIRT1蛋白表达降低(P＜0.05).与衰老组比较,药物组细胞染色阳性率明显降低(P＜0.05),细胞增殖水平显著增强(P＜0.05),P53蛋白、P16蛋白和P21蛋白明显降低,ROS荧光强度明显降低,CAT、SOD活性明显增加(P＜0.05),磷酸化AMPK和SIRT1蛋白增加(P＜0.05).结论 米诺地尔减轻了 Ang Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞衰老,同时促进了 AMPK/SIRT1信号通路的激活.
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