探讨微小RNA(miRNA，miR)-148a-3p对强直性脊柱炎患者T细胞自噬及炎症应答的影响及其作用机制。
方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测强直性脊柱炎(AS)患者T细胞中miR-148a-3p和DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达水平。利用Western blot检测自噬标志分子[微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin-1和自噬相关基因5(ATG5)]的蛋白表达量。利用双荧光素酶报告系统、RT-qPCR及Western blot法验证miR-148a-3p与DNMT1的靶向作用关系。
结果与正常对照组比较，AS患者T细胞中miR-148a-3高表达，而DNMT1表达水平较低。miR-148a-3p过表达显著增加了炎性因子白细胞介素(IL)-6、IL-17和IL-23的表达水平(4.23±0.34比1.06±0.15，P＝0.000；2.87±0.29比1.02±0.17，P＝0.000；3.12±0.32比1.07±0.21，P＝0.000)；反之，抑制miR-148a-3p的表达，细胞因子表达水平则明显降低(0.41±0.14比0.97±0.13，0.52±0.10比0.95±0.14，0.45±0.12比0.98±0.18；P＝0.008)。此外，过表达miR-148a-3p明显降低自噬标志基因LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、ATG5和Beclin-1的表达水平(0.44±0.13比1.06±0.16，P＝0.003；0.38±0.11比1.07±0.16，P＝0.002；0.42±0.12比1.03±0.14，P＝0.003)；相反，下调miR-148a-3p则增加自噬水平(2.89±0.28比1.03±0.17，P＝0.000；3.31±0.29比0.98±0.18，P＝0.000；3.68±0.31比1.02±0.15，P＝0.000)。双荧光素酶报告基因检测结果显示，miR-148a-3p与DNMT1存在直接的靶标关系(0.44±0.07比1.00±0.12，P＝0.002；1.68±0.17比1.00±0.11，P＝0.004)；且miR-148a-3p过表达抑制DNMT1的mRNA(0.38±0.17比0.98±0.23，P＝0.011)和蛋白(0.41±0.17比0.97±0.25，P＝0.014)表达水平，反之则促进DNMT1的mRNA(3.83±0.29比1.04±0.21，P＝0.000)和蛋白(3.46±0.28比1.02±0.20，P＝0.000)表达。
结论miR-148a-3p其可以通过靶向调控DNMT1的表达来调节成T细胞自噬及炎症应答。