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根据已发表的口蹄疫病毒(FMDV)基因序列设计了一对引物,扩增FMDV 3D后1/3区段,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从组织培养液中扩增出大小为489 bp的基因片段,建立了FMDV RT-PCR检测方法.该方法灵敏度高,可检测出0.01个TCID50的病毒含量;特异性好,不与其他病毒如PRV、PRRSV、JEV等发生交叉反应.阳性样品的检测结果与反向间接血凝(IHA)检测结果的符合率为100%.应用所建立的RT-PCR方法,对采自3个奶牛场的55份鲜奶样品及40份牛鼻拭子样品进行检测.