针对人HIF-1α的RNA干扰质粒构建及其转染急性髓性白血病骨髓基质细胞的研究

来源 :中国实用内科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huhu39
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目的构建针对人 HIF-1α的 miRNA 干扰表达载体并转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞。方法设计合成针对人 HIF-1α基因的 miRNA 前体寡核苷酸,通过退火成为双链 DNA 片段,以 T4 DNA 连接酶与线性化 pcDNA~(TM)6.2-GW/EmGFP-miR 质粒连接,构建含 HIF-1α前体miRNA 的重组质粒。经测序鉴定后,通过脂质体介导转染 Objective To construct miRNA interference expression vector targeting human HIF-1α and transfect it into human acute myeloid leukemia bone marrow stromal cells. Methods The miRNA precursor oligonucleotide targeting human HIF-1α gene was designed and synthesized. The annealed double-stranded DNA fragment was ligated with the linearized pcDNA (TM) 6.2-GW / EmGFP-miR plasmid using T4 DNA ligase Recombinant plasmid containing miRNA of HIF-1α precursor. After sequencing identification, liposome-mediated transfection
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