【摘 要】
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背景：糖酵解在破骨细胞分化过程中起关键作用，成熟破骨细胞骨吸收主要依赖于糖酵解。丙酮酸作为糖酵解的终末产物，在三大营养物质的代谢中起重要的枢纽作用。目的：探讨丙酮酸对破骨细胞分化的影响。方法：采用CCK-8法检测不同浓度（0.1,1,10,20,30,50 mmol/L）丙酮酸对RAW264.7细胞活性的影响，筛选出安全浓度丙酮酸。将RAW264.7细胞分组干预：空白对照组加入完全培养基（含体积分
【机 构】
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贵州医科大学口腔医学院/附属口腔医院
【基金项目】
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国家自然科学基金（82060207）,项目负责人：廖健； 贵州省卫生健康委科学技术基金（gzwkj2022-165）,项目负责人：廖健； 大学生创新创业训练项目（202110660022）,项目负责人：夏千禧,指导老师：廖健；
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背景：糖酵解在破骨细胞分化过程中起关键作用，成熟破骨细胞骨吸收主要依赖于糖酵解。丙酮酸作为糖酵解的终末产物，在三大营养物质的代谢中起重要的枢纽作用。目的：探讨丙酮酸对破骨细胞分化的影响。方法：采用CCK-8法检测不同浓度（0.1,1,10,20,30,50 mmol/L）丙酮酸对RAW264.7细胞活性的影响，筛选出安全浓度丙酮酸。将RAW264.7细胞分组干预：空白对照组加入完全培养基（含体积分数10%胎牛血清、1%双抗的α-MEM培养基），对照组加入含核因子κB受体活化因子配体的完全培养基，实验组加入核因子κB受体活化因子配体与不同浓度丙酮酸的完全培养基，分别进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色、细胞骨架纤维性肌动蛋白染色、RT-qPCR检测、Western blot检测与骨吸收陷窝实验。结果与结论：（1）CCK-8检测显示，丙酮酸对RAW264.7细胞的最大半数抑制浓度为8.923 mmol/L，后续实验选择0.1,1,5 mmol/L为安全浓度；（2）抗酒石酸酸性磷酸酶染色显示，1 mmol/L丙酮酸促进RAW264.7细胞向破骨细胞分化；（3）细胞骨架纤维性肌动蛋白染色显示，1mmol/L丙酮酸促进破骨细胞肌动蛋白环的形成，5mmol/L丙酮酸不影响破骨细胞分化也不干扰破骨细胞肌动蛋白环的形成；（4）RT-qPCR检测显示，安全浓度范围内的丙酮酸对破骨分化相关基因核转录因子活化T细胞核因子C1、抗酒石酸酸性磷酸酶的mRNA相对表达量无明显影响；（5）Western blot检测显示，0.1,1 mmol/L丙酮酸对破骨分化相关蛋白核转录因子活化T细胞核因子C1的表达量无明显影响，5 mmol/L丙酮酸抑制核转录因子活化T细胞核因子C1蛋白的表达，0.1,1,5 mmol/L丙酮酸促进破骨分化相关蛋白c-fos的表达；（6）1 mmol/L丙酮酸促进破骨细胞骨吸收陷窝的形成；（7）结果表明，1 mmol/L丙酮酸在体外对核因子κB受体活化因子配体诱导的RWA264.7细胞向破骨细胞分化具有促进作用。
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