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为建立病毒性出血性败血症病毒（VHSV）焦磷酸测序检测技术，本研究通过对VHSV靶基因特异性序列的同源性分析，设计出适合焦磷酸测序特异性扩增和测序的引物，对焦磷酸测序反应体系和反应程序进行优化，建立了VHSV焦磷酸测序检测方法。结果表明，该方法仅对目的病毒基因扩增，而对其它病毒检测为阴性，表明该方法特异性好；该方法最低检出核酸量为82拷贝／μL，灵敏度高。选取国内采集与进口的鱼类样本共计1924批次进行VHSV检测，结果显示，焦磷酸测序检测方法检测结果与常规RT-PCR一致，该方法的特异性和灵敏度可以满足