【摘 要】
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【目的】为了揭示地锦草（EH）在猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）中的抗炎和抗氧化作用。【方法】利用不同浓度EH水提物（0、5、10、50、125、200μg/mL）处理IPEC-J2细胞12 h,通过CCK-8法检测IPEC-J2细胞活力，确定EH处理细胞的最佳浓度。将IPEC-J2细胞随机分为对照组（CT）、脂多糖（LPS）组（LPS）、EH+LPS组（ELP）,每组3个重复。CT组细胞正常培养
【机 构】
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河南农业大学农业农村部动物生化与营养重点实验室
【基金项目】
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河南省科技攻关计划（212102110356、222102110402）；
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【目的】为了揭示地锦草（EH）在猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）中的抗炎和抗氧化作用。【方法】利用不同浓度EH水提物（0、5、10、50、125、200μg/mL）处理IPEC-J2细胞12 h,通过CCK-8法检测IPEC-J2细胞活力，确定EH处理细胞的最佳浓度。将IPEC-J2细胞随机分为对照组（CT）、脂多糖（LPS）组（LPS）、EH+LPS组（ELP）,每组3个重复。CT组细胞正常培养不做任何处理，LPS组细胞用5μg/mL LPS处理，ELP组细胞用5μg/mL LPS和最佳浓度EH共处理，各组细胞均处理12 h后，收集细胞和上清。利用实时荧光定量PCR方法检测细胞中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Keap1）、核因子E2相关因子（Nrf2）、血红素加氧酶1（HO-1）mRNA表达；ELISA法检测上清液中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的含量，化学荧光法检测上清液中活性氧（ROS）水平。【结果】与0μg/mL EH组相比，5、50μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力显著增加（P＜0.05）;10μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力极显著增加（P＜0.01）,125μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力下降，但差异不显著（P＞0.05）,200μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力极显著下降（P＜0.01）。因此，后续选用10μg/mL EH处理IPEC-J2细胞。与CT组相比，LPS组IPEC-J2细胞中IL-6、TNF-α基因mRNA的表达极显著增加（P＜0.01）,上清液中MDA含量和细胞ROS的荧光强度极显著增加（P＜0.01）,Keap1、Nrf2和HO-1基因mRNA表达极显著下降（P＜0.01）,抗氧化酶SOD、GSH-Px的含量极显著下降（P＜0.01）。与LPS组相比，ELP组IPEC-J2细胞中IL-6基因mRNA表达极显著下降（P＜0.01）,TNF-α基因mRNA的表达显著下降（P＜0.05）,细胞上清液中MDA含量和细胞ROS的荧光强度均极显著下降（P＜0.01）,Keap1、Nrf2、HO-1基因mRNA表达极显著增加（P＜0.01）,GSH-Px含量极显著升高（P＜0.01）,SOD含量显著升高（P＜0.05）。【结论】EH水提物在猪小肠上皮细胞中通过激活Keap1/Nrf2信号，提高抗氧化酶SOD和GSH-Px含量，启动下游靶基因HO-1表达，发挥抗炎和抗氧化的作用，且10μg/mL EH水提物作用效果最佳。
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