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摘要：肝硬化是严重危害人类健康的常见疾病，其显著特点是门静脉高压。构建稳定、可复制、便捷和仿真性强的肝硬化动物模型是研究肝硬化的必要条件，根据不同研究目的，在实验动物的选用以及建模的方法上都有所不同。本文就肝硬化模型常用的建立方法加以综述。
关键词：肝硬化，动物模型，造模方法
中图分类号：R657.3+1文献标识码： A 文章编号：
肝硬化门静脉高压症是威胁人类健康的重要疾病之一，引起肝硬化的原因很多如饮食、肝毒性药物、寄生虫、病毒感染等等。目前对此类疾病的研究需要以肝硬化动物模型(cirrhosis model, CM)为基础，因此必须构建一种稳定、可复制、便捷和仿真性强的肝硬化动物模型，其病理改变应呈现阶段性进展、分期明显。当前主要有两大类建模方案:单因素诱导建模和多因素诱导建模。下面对目前常用的几种肝硬化的造模方法进行阐述。
1.单因素造模
1.1四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)
CCl4是最为常用的肝脏毒素，是经典的实验性肝损伤动物模型所用外源性化合物。CCl4进入机体后，首先经肝细胞微粒体细胞色素P450激活生成活性三氯甲基(CCl3-),攻击肝细胞膜的磷脂引起脂质过氧化从而破坏肝细胞的膜性结构，CCl3-还可与蛋白质共价结合，损害线粒体导致还原性辅酶A(NADH)和三磷酸腺苷(ATP)在肝内生成受阻，抑制脂肪酸氧化和三羧酸循环。肝组织受到损害-修复-损害的循环破坏作用，最终导致肝纤维化及肝硬化的发生。
CCl4造模途径主要有灌胃、皮下注射及腹腔注射等，造模时间随给药途径、剂量以及实验动物的不同而不同。常用40%～60%CCl4橄榄油溶液皮下注射，0.3ml/100g体重，首剂加倍，每周2次，共8～12周形成肝纤维化。杨开选等于实验期的第1、3、6和8周用10%（1体积CCl4和9体积玉米油混合）的CCl4，按0.1ml/100g体重，对小鼠进行腹腔注射，取肝组织作组织病理学观察，第8周肝小叶中央区和汇管区纤维间隔相互连接，肝小叶结构和血液循环形成假小叶，即出现肝硬化。
1.2 酒精性肝硬化模型(alcoholic cirrhosis model,ACM)
肝脏是酒精在机体内代谢的主要场所，长期过度饮酒是导致酒精性肝硬化的主要原因。乙醇进入肝细胞抑制线粒体三羧酸循环，脂肪酸氧化减少而合成增加，甘油三酯和脂肪酸在肝内蓄积导致肝细胞脂肪变4。同时乙醇还可以直接损伤血管内皮，导致血小板聚集，释放大量细胞因子，激活储脂细胞转化成纤维细胞，合成分泌大量胶原引起肝纤维化甚至发展为肝硬化。
目前国内常用方法是喂养固体饲料的同时，将一定浓度的酒精定时定量灌胃。李异玲等用40%乙醇，每日8g/kg体重，每天3次灌胃，自第5周开始，以50%乙醇，每日9g/Kg，每天3次灌胃，自第9周开始50%乙醇，每日10g/Kg，每天3次灌胃至12周末，通过不断递增乙醇的浓度，于12周末形成轻度肝纤维化改变。酒精诱导造模比较困难，因为酒精的摄入量比较难控制，管导入技术比较难掌握，同时实验动物昂贵，耗时比较长。
1.3 其他造模法
长期应用低剂量致癌物可以引起肝硬化，如二甲基亚硝胺（DMNA）是常见的致肝癌剂，常用的造模方法是按1mL/Kg腹腔注射1%DMNA，每周前3d给药，每天1次，持续3周，第4周仅在周一给药1次，4周后大鼠肝硬化形成；胆总管结扎，4～8周即可形成肝硬化，国内史留斌曾建立猪的胆汁性肝硬化模型，用于评估原位辅助性肝移植手术效果；免疫诱导法通常采用异种动物血清、蛋白作为抗原，通过反复注射的方式来建立免疫性肝硬化模型，黄志刚等用Wistar大鼠腹腔注射猪血清诱导免疫性肝纤维化模型，第8周后均形成肝纤维化；采用皮下注射曼氏血吸虫尾蚴，亦可经皮肤或水感染，虫卵沿门静脉肝内分支大量沉积，可诱发肝内广泛的肉芽肿性炎症反应及免疫反应，同时促使大量成纤维细胞活化增生，产生过多胶原纤维，最终导致肝硬化的形成，造模时间长60-90天，死亡率高约为40%-50%；20世纪80年代起，树鼩人HBV感染模型的研究不断取得进展，树鼩感染人HBV以后，呈慢性肝炎及轻度纤维组织增生图像，部分肝细胞呈腺管样排列，并出现肝细胞增生灶或增生结节，可见少量的散在或聚集分布的异形增生的肝细胞。
参考文献：
[1]Henkel C, Roderfeld M, Weiskirchen R, et al. Changesof the hepatic proteome in murine models for toxically inducedfibrogenesis and sclerosing cholangitis[J]. Proteomics,2006,6(24):6538- 6548.
[2]Shi LB,Peng CH,Peng SY,et al.Preliminary experimental study on treatment of portal hypertension with auxiliary partial orthotopic liver transplantation[J].Zhongguo WeiZhong Bing Ji Jin Yi Xue,2004,16(12):730-733
[3]Kremsdorf D, Brezillon N. New animal models for hepatitis C viral infection and pathogenesis studies[J]. World J Gastroenterol,2007,13(17):2427- 2435.
作者簡介：陈玉龙（1984-）男，江西丰城人，助教，硕士，江西中医学院教师。研究方向：动物分子遗传。
关键词：肝硬化，动物模型，造模方法
中图分类号：R657.3+1文献标识码： A 文章编号：
肝硬化门静脉高压症是威胁人类健康的重要疾病之一，引起肝硬化的原因很多如饮食、肝毒性药物、寄生虫、病毒感染等等。目前对此类疾病的研究需要以肝硬化动物模型(cirrhosis model, CM)为基础，因此必须构建一种稳定、可复制、便捷和仿真性强的肝硬化动物模型，其病理改变应呈现阶段性进展、分期明显。当前主要有两大类建模方案:单因素诱导建模和多因素诱导建模。下面对目前常用的几种肝硬化的造模方法进行阐述。
1.单因素造模
1.1四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)
CCl4是最为常用的肝脏毒素，是经典的实验性肝损伤动物模型所用外源性化合物。CCl4进入机体后，首先经肝细胞微粒体细胞色素P450激活生成活性三氯甲基(CCl3-),攻击肝细胞膜的磷脂引起脂质过氧化从而破坏肝细胞的膜性结构，CCl3-还可与蛋白质共价结合，损害线粒体导致还原性辅酶A(NADH)和三磷酸腺苷(ATP)在肝内生成受阻，抑制脂肪酸氧化和三羧酸循环。肝组织受到损害-修复-损害的循环破坏作用，最终导致肝纤维化及肝硬化的发生。
CCl4造模途径主要有灌胃、皮下注射及腹腔注射等，造模时间随给药途径、剂量以及实验动物的不同而不同。常用40%～60%CCl4橄榄油溶液皮下注射，0.3ml/100g体重，首剂加倍，每周2次，共8～12周形成肝纤维化。杨开选等于实验期的第1、3、6和8周用10%（1体积CCl4和9体积玉米油混合）的CCl4，按0.1ml/100g体重，对小鼠进行腹腔注射，取肝组织作组织病理学观察，第8周肝小叶中央区和汇管区纤维间隔相互连接，肝小叶结构和血液循环形成假小叶，即出现肝硬化。
1.2 酒精性肝硬化模型(alcoholic cirrhosis model,ACM)
肝脏是酒精在机体内代谢的主要场所，长期过度饮酒是导致酒精性肝硬化的主要原因。乙醇进入肝细胞抑制线粒体三羧酸循环，脂肪酸氧化减少而合成增加，甘油三酯和脂肪酸在肝内蓄积导致肝细胞脂肪变4。同时乙醇还可以直接损伤血管内皮，导致血小板聚集，释放大量细胞因子，激活储脂细胞转化成纤维细胞，合成分泌大量胶原引起肝纤维化甚至发展为肝硬化。
目前国内常用方法是喂养固体饲料的同时，将一定浓度的酒精定时定量灌胃。李异玲等用40%乙醇，每日8g/kg体重，每天3次灌胃，自第5周开始，以50%乙醇，每日9g/Kg，每天3次灌胃，自第9周开始50%乙醇，每日10g/Kg，每天3次灌胃至12周末，通过不断递增乙醇的浓度，于12周末形成轻度肝纤维化改变。酒精诱导造模比较困难，因为酒精的摄入量比较难控制，管导入技术比较难掌握，同时实验动物昂贵，耗时比较长。
1.3 其他造模法
长期应用低剂量致癌物可以引起肝硬化，如二甲基亚硝胺（DMNA）是常见的致肝癌剂，常用的造模方法是按1mL/Kg腹腔注射1%DMNA，每周前3d给药，每天1次，持续3周，第4周仅在周一给药1次，4周后大鼠肝硬化形成；胆总管结扎，4～8周即可形成肝硬化，国内史留斌曾建立猪的胆汁性肝硬化模型，用于评估原位辅助性肝移植手术效果；免疫诱导法通常采用异种动物血清、蛋白作为抗原，通过反复注射的方式来建立免疫性肝硬化模型，黄志刚等用Wistar大鼠腹腔注射猪血清诱导免疫性肝纤维化模型，第8周后均形成肝纤维化；采用皮下注射曼氏血吸虫尾蚴，亦可经皮肤或水感染，虫卵沿门静脉肝内分支大量沉积，可诱发肝内广泛的肉芽肿性炎症反应及免疫反应，同时促使大量成纤维细胞活化增生，产生过多胶原纤维，最终导致肝硬化的形成，造模时间长60-90天，死亡率高约为40%-50%；20世纪80年代起，树鼩人HBV感染模型的研究不断取得进展，树鼩感染人HBV以后，呈慢性肝炎及轻度纤维组织增生图像，部分肝细胞呈腺管样排列，并出现肝细胞增生灶或增生结节，可见少量的散在或聚集分布的异形增生的肝细胞。
参考文献：
[1]Henkel C, Roderfeld M, Weiskirchen R, et al. Changesof the hepatic proteome in murine models for toxically inducedfibrogenesis and sclerosing cholangitis[J]. Proteomics,2006,6(24):6538- 6548.
[2]Shi LB,Peng CH,Peng SY,et al.Preliminary experimental study on treatment of portal hypertension with auxiliary partial orthotopic liver transplantation[J].Zhongguo WeiZhong Bing Ji Jin Yi Xue,2004,16(12):730-733
[3]Kremsdorf D, Brezillon N. New animal models for hepatitis C viral infection and pathogenesis studies[J]. World J Gastroenterol,2007,13(17):2427- 2435.
作者簡介：陈玉龙（1984-）男，江西丰城人，助教，硕士，江西中医学院教师。研究方向：动物分子遗传。