目的 探讨RNAi技术体外联合抑制MDR1和MRP1基因逆转肝细胞癌多药耐药的效果.方法 建立肝细胞癌多药耐药细胞株,分别构建MDR1和MRP1基因的shRNA的质粒载体,转染肝细胞癌多药耐药细胞株.设空白对照组、MDR1单基因抑制HepG2/MDR-1-si组、单基因抑制HepG2/MRP-1-si组、联合基因抑制HepG2/mm-si组.流式细胞术检测细胞周期及凋亡,MTT法检测转染后细胞耐药性,CCK-8试剂盒检测细胞活性及相对增值情况,caspase-3活性检测用分光光度仪,实时PCR测定MDR1/mRNA、MRP1/mRNA.结果 成功构建pSUPER-HepG2/MDR-1-si、pSUPER-HepG2/MRP-1-si.MRP-1-mRNA在HepG2/mm-si组与针对该基因设计的单基因沉默组(HepG2/MRP-1-si)的表达差异无统计学意义(P＞0.05);在HepG2/mm-si组与HepG2/MDR-1-si)组的表达差异亦无统计学意义(P＞0.05).HepG2/mm-si组Caspase-3活性明显高于HepG2/MRP-1-si,差异有统计学意义(14 623.7±338.9比13 215.7 ±90.6,P ＜0.05).CCK-8法检测显示双基因沉默组的细胞活性、细胞数目与其他各组比较明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).对照组HepG2/MDR-1-si、HepG2/MRP-1-si的耐药性分别为HepG2/mm-si组的1.39倍和1.58倍.HepG2/mm-si组耐药细胞株凋亡期细胞数量明显少于HepG2/MRP-1-si和HepG2/MDR-1-si组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 siRNA体外联合抑制MDR1和MRP1基因可以显著逆转肝细胞癌多药耐药。
RNA干扰介导的MDR1和MRP1基因沉默逆转肝细胞癌多药耐药
【摘 要】
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目的 探讨RNAi技术体外联合抑制MDR1和MRP1基因逆转肝细胞癌多药耐药的效果.方法 建立肝细胞癌多药耐药细胞株,分别构建MDR1和MRP1基因的shRNA的质粒载体,转染肝细胞癌多药耐药细胞株.设空白对照组、MDR1单基因抑制HepG2/MDR-1-si组、单基因抑制HepG2/MRP-1-si组、联合基因抑制HepG2/mm-si组.流式细胞术检测细胞周期及凋亡,MTT法检测转染后细胞耐药
【机 构】
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545006柳州市人民医院肝胆胰外科,545006柳州市人民医院肝胆胰外科,545006柳州市人民医院肝胆胰外科,545006柳州市人民医院肝胆胰外科,桂林医学院,545006柳州市人民医院肝胆胰外科
【出 处】
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中华肝胆外科杂志
【发表日期】
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2014年20期
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