小干扰RNA对人内皮细胞株类表皮生长因子域7基因表达抑制作用的实验研究

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目的 研究小干扰RNA(siRNA)对类表皮生长因子域7(egfl7)基因表达的抑制作用.方法利用Ambion公司设计合成的以egfl7为靶标的siRNA,通过脂质体将siRNA转入人脐静脉内皮细胞株,以未转染siRNA细胞和转染无关siRNA细胞为对照,利用MTS[3-(4,5-dimethylthiaz-2-yl)-5(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfopheny)-2H-tetrazolium,inner salt]法检测siRNA对细胞存活率的影响,同时检测乳酸脱氢酶和三磷酸腺苷,观察siRNA对细胞生长的影响,RT-PCR法检测egfl7mRNA水平的改变,Western blot检测egfl7蛋白表达的变化.结果 siRNA各组与对照组细胞存活率差异均有统计学意义(P<0.05),乳酸脱氢酶及三磷酸腺苷释放量差异也存在统计学意义(P<0.01).转染24h后,siRNA组egfl7 mRNA与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),同时egfl7蛋白表达也被明显抑制(P<0.01),其中siRNA1的抑制效率最高.结论体外转录合成的siRNA可抑制人脐静脉内皮细胞egfl7基因的表达.
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