【摘 要】
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目的 建立稳定过表达野生型p53基因( wtp53)的人皮肤成纤维细胞系,探讨过表达p53基因及中波紫外线(UVB)照射对人皮肤成纤维细胞(HSF)衰老的影响.方法 在脂质体lipofectamineT
【机 构】
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南京医科大学附属南京第一医院皮肤科,南京医科大学附属明基医院皮肤科
【基金项目】
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南京市卫生局青年科技人才启动项目;国家自然科学基金
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目的 建立稳定过表达野生型p53基因( wtp53)的人皮肤成纤维细胞系,探讨过表达p53基因及中波紫外线(UVB)照射对人皮肤成纤维细胞(HSF)衰老的影响.方法 在脂质体lipofectamineTM 2000介导下,将含有wtp53的真核表达质粒pCMV-p53导入HSF中,经G418筛选抗性克隆,扩大培养,建立转染克隆细胞系.用RT-PCR,实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分析目的基因及其蛋白表达.亚毒性剂量UVB照射细胞,以染色法检测SAβ-gal活性,MTT法检测细胞增殖能力.结果 成功构建过表达p53的HSF细胞系,转染细胞中存在p53基因及蛋白的稳定过表达.过表达p53的细胞株不论UVB照射与否SAβ-gal活性均未见增高,过表达p53可使HSF的增殖能力减弱,但对UVB诱导的细胞生长停滞的影响并不显著.结论 过表达P53不能促进HSF的复制衰老和UVB诱导的早期衰老,过表达p53引起的HSF增殖减弱可能与细胞凋亡有关而非衰老.
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